ELISA这个方法的原理,大家都很明白,网上的资料很多。可真正用起来的时候,偶然间就会有点犯糊涂,我谈一下自己的理解。
1、有些客户会用OVA(卵清卵白)做一些哮喘,过敏性肠炎的模型,然后会检测粘膜特异性的sIgA以及血清内里IgG,IgE等指标。当客户向我咨询购置这几个指标的试剂盒的时候,我很肯定地说这些指标的检测要你自己特制,不会有商品化的试剂盒出售的。当你百度一下时,页面出来大量的商品化的试剂盒,千篇一律的明书时候,我真的是蒙了,我怀疑自己跟不上时代了。我不去评论这些试剂盒的真假,我仍旧建议做这些检测指标的朋友,选择sigma公司V级别的OVA,然后用这个来造模,自己包板摸条件,用OD值来比较抗体含量的变化。
2、NO的检测,一般都是采用经典的Greiss法,如今市场上竟然有NO ELISA试剂盒,真是彻夜未眠也搞不明白。另外还有做氧化应激指标MDA的检测,我还是推荐各位用碧云天或者进口的检测试剂盒,而不是ELISA试剂盒。
3、ELISA检测方法简单,灵敏度高,我个人认为ELISA最适合检测血清或者培养上清的细胞因子、胰岛素、激素等排泄型的小分子卵白的定量检测;病原体抗原的定性与定量;评估自己制备的血清抗体的效价等。很多客户有个误区,拿来一个指标就想当然地尝试用ELISA去检测,我还是建议多动脑,该检测活性的检测活性,该做western的做western。
4、对付一些小分子的检测,例如:前线腺素、糖皮质激素的检测,我的理解是要用竞争法ELISA去检测,也要购买采用这个方法的盒试剂盒。ELISA试剂盒一般细胞因子的检测,都是采用常规的夹心法ELISA检测,由于因子分子量比力大,一般10几个KD左右,很容易找到两个或多个抗原表位。而小分子很难找到两个不通的表位,也就决定了包被抗体和检测抗体无法同时结合小分子并固相化。解决方案便是酶标板上包被二抗,每个孔加入一定量的酶标的小分子,然后加样品,再加不带标志的检测抗体,显色底物。样品的目标小分子的含量越高,吸光度越低。
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