心肌细胞刚接种时形状为圆形或椭圆形,大约在 24 h左右基本贴壁,此时细胞伸出伪足,伪足在镜下为纤维状条索,细胞胞体则呈现不规则形状,如多角形,部分细胞有聚集倾向,细胞搏动效果较好, DMEM培养基在初始培养时为深红色,两天后变为淡黄色,应该是营养成分下降的表现,也说明细胞生长状况良好。我们也参考了一些国外文献的培养方法加以补充。鉴定的最简单的办法就是搏动与否,注意:当搏动比较微弱的时候,在 10 倍物镜下可能看不到搏动,换成20 或40倍的物镜可能能观察到。检验操作是否合格的最好的办法就是看心肌细胞的纯度和搏动能力。另外,心肌细胞表达肌动蛋白,可以作为鉴定,但不是唯一的特征性指标,因为平滑肌细胞也表达。
乳鼠心肌细胞属于原代生长细胞,培养过程较为繁琐。文献上有多种浓度胰酶消化方法,0.06%浓度的胰酶对细胞损害较小,但这个浓度消化所需时间较长。采取多次反复低浓度消化的方法,每次消化一些后,用吸管抽取出上清液,离心所得即为心肌细胞。利用心肌细胞和成纤维细胞贴壁时间的不同,采用差速贴壁 1.5h,充分去除成纤维类细胞,达到纯化的目的。成纤维细胞胞体呈梭型或不规则三角形,中央有卵圆形核,胞质突起,生长时呈放射状,并且会增殖,不搏动,很好和心肌细胞鉴别。消化和吹打一定不要过度,是保证心肌细胞活力最重要的一个原则。而接种密度(一般不低于 105/ml),也将影响到心肌细胞的搏动及同步化搏动。
升麻Cimicifuga foetida Cimiside B 升麻苷B 152685-91-1 C40H64O13 ≥97%
升麻Cimicifuga foetida Khellin 凯林 82-02-0 C14H12O5 ≥96%
升麻Cimicifuga foetida Norkhellol 4-羟基-7-(羟基甲基)-5H-呋喃并[3,2-G][1]苯并吡喃-5-酮 4439-68-3 C12H8O5 ≥97%
升麻Cimicifuga foetida prim-O-Glucosylangelicain (S)7-[(BETA-D-吡喃葡萄糖氧基)甲基]-2,3-二氢-4-羟基-2-(1-羟基-1-甲基乙基)-5H-呋喃并[3,2-G][1]苯并吡喃-5-酮 85889-15-2 C21H26O11 ≥95%
升麻Cimicifuga foetida Visnagin 甲氧呋豆素 82-57-5 C13H10O4 ≥95%
升麻 Cimicifuga foetida L. Isoferulic acid 异阿魏酸 537-73-5 C10H10O4 ≥98%
升麻 Cimicfuga goetida L. Cimifugin 升麻素 37921-38-3 C16H18O6 ≥98%
深山紫堇 Corydalis pallida(Thunb.)Pers. Cryptopine 隐品碱 482-74-6 C21H23NO5 ≥98%
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