乳制品中有机氯农药残留的检测解决方案

乳制品中有机氯农药残留的检测解决方案

牛奶中有机氯农药残留含量是影响牛奶质量安全的重要因素之一, 有机氯农药具有毒性大、难降解、水溶性低和酯溶性高的特点, 可随食物链发生富集放大,对人体健康和生态环境造成很大危害。

  上海炎怡生物在参考 《GBT 23210-2008 牛奶和奶粉中511种农药GC-MS测定-标准》的基础上，建立了SPE固相萃取柱-ProElut Florisil进行前处理净化，气相色谱法检测牛奶中有机氯农药残留解决方案，具有前处理简单，回收率损失少，固相萃取柱净化效果明显、方法重现性好等优点，详细解决方案如下：

1 适用范围

适用于牛奶等液态乳制品中α-六六六、β-六六六、δ-六六六、γ-六六六、4,4’-滴滴滴、4,4’-滴滴涕、2,4’-滴滴涕、4,4’-滴滴伊的检测。

2 样品准备/提取           

  牛奶、原料乳等液态奶制品

(1)    称取10 g样品，加入10 mL丙酮：正己烷=1：9，涡旋混合1 min；

(2)    再依次加入10 mL丙酮：正己烷=1：9，4 g 氯化钠，2 mL 200 g/L 乙酸铅溶液，涡旋振荡混合5 min，4000 rpm离心5 min；

(3)    取上清液10 mL（相当于5 g样品），作为上样液待净化。

3 SPE柱净化 ProElut Florisil 1000 mg/6 mL

(1)活   化： 加入10 mL丙酮：正己烷=1：9，流出液弃去；

(2)上    样： 将上样液加入柱中，收集流出液；

(3)洗    脱： 加入5 mL丙酮：正己烷=1：9，收集流出液，合并步骤（2）、（3）流出液；

(4)浓    缩：

  在40℃下通入氮气将流出液浓缩至大约0.5 mL，正己烷定容至1 mL，供GC检测。

4 GC分析条件

4.1色谱柱：DM-1701 30 m×0.32 mm×0.25 μm

4.2进样口温度：260 ℃

检测器温度：310℃

升温程序：初始温度70 ℃，以30 ℃/min升温至205 ℃，保持2 min，再以10 ℃/min升温至280℃，保持3 min

4.3载气：氮气，流速：1.0 mL/min；尾吹，流速：30 mL/min

4.4进样方式：分流进样，分流比50：1

进样量：1 μL

5 添加回收结果

5.1牛奶样品中8种有机氯农药残留添加回收结果

NO. 化合物名称 添加水平（mg/kg） 回收率（%）

1 α-六六六 0.1 95.27

2 β-六六六 0.1 96.20

3 δ-六六六 0.1 92.35

4 γ-六六六 0.1 99.41

5 4,4’-滴滴滴 0.1 98.26

6 4,4’-滴滴涕 0.1 107.85

7 2,4’-滴滴涕 0.1 99.90

8 4,4’-滴滴伊 0.1 104.55s

乳制品中8种有机氯农药残留的检测相关产品信息  

 货号 名称 规格 样品前处理 65006 ProElut Florisil萃取小柱 1000 mg/6 mL 244358 12管防交叉污染真空SPE萃取装置 12位 4803 1,3,6 mL柱管通用连接器 15/pk 4806 考克(控制流量) 15/pk 99011 真空/正压两用泵，无油 1/pk 99013 抽滤瓶套装 (包括硅橡胶管2米,2L抽滤瓶及橡胶塞) 1/pk 37177 针头式过滤器 Nylon 13 mm,0.22 μm 100/pk 37180 针头式过滤器 Nylon 13 mm,0.45 μm 100/pk 色谱柱及保护柱 7331 DM-1701 30 m×0.32 mm×0.25 μm 标准品 12-SP-DC03Z 8种有机氯农药混标 100ug/ml in Acetone 1ml 12-PS-692 α-六六六[319-84-6] 100mg 12-PS-691 β-六六六[319-85-7] 100mg 12-F105JS δ-六六六[319-86-8] 1ml 12-PS-71 γ-六六六[58-89-9] 500mg 12-PS-72 4,4’-滴滴滴[72-54-8] 250mg N-10876-1G 4,4’-滴滴涕[50-29-3] 1G N-12708-50MG 2,4’-滴滴涕[789-02-6] 50mg 12-F93JS 4,4’-滴滴伊[72-55-9] 1ml HPLC溶剂Ÿ缓冲盐Ÿ离子对试剂 56-15319-50G 乙酸铅[6080-56-4] 50G 50115 正己烷  HPLC级 4 L 通用色谱产品 52401B 瓶架/蓝色 50 孔 52401A 瓶架/白色 50孔 5323 样品瓶（棕色/螺纹） 2 mL, 100/pk 5325 样品瓶盖/含垫（已经组装） 100/pk H87900 GC 进样针 5 μL

气相色谱法是我国食品卫生检验标准第一法。本法具有快速、灵敏、简便、准确和分离能力高的特点，并能将六六六、滴滴涕各异构体分离，准确定量。本法最低检测限10—11～101。g。在一般情况以外标法(标准液系列)简便易行，而内标法(加人内标物，如环氧七氯)会产生由仪器响应改变而引起的误差和进样误差。方法回收率，。一BHC 88％～95％，7-BHC97％～106％，fl-BHC 85％~101％，&BHC 94~101％，P，P’一DDE 97％~101％，P，P，一DDT100％～102％。

5．检测

①肉类：

a．有机溶剂提取：称取20 g肉样于研钵中，加80 g无水Na2S04，研成干粉状，移人具塞三角瓶中，加环己烷100 mL，振荡30 rain，过滤。滤液转入分液漏斗中，加浓H：S0410 mL，振摇，放气，静置，分层，弃磺化层。有机相多次加浓H。S04 5 mI。，反复磺化，直至无色透明，弃硫酸层。有机相加2％Na2S04溶液100 mL，振摇，放气，静置，分层，弃水层。有机相加15 g无水NazS04脱水于K—D浓缩器中，浓缩至0．5-1．0 mL。取浓缩液2～5弘L注入GC仪检测(同时做空白实验)。

b．酸消化：取肉样于具塞三角瓶中，]E(1-k1)HCl0~+冰乙酸40 mI。，置80℃水浴加热5 h，移人分液漏斗中，加环己烷30 mL，20 mL，20 mL，20 mL分次提取，合并环己烷，经无水NaaSO脱水，过滤，转入100 mI。g-l~oe，定溶，然后用硫酸磺化，以下操作同a法(同时做空白实验)。

②蛋与蛋制品：称取10 g蛋样于具塞三角瓶中，JJ~NiN 50 mI。，振荡30 min，过滤于浓缩器中，除丙酮。在剩下的残渣中加50 mL环己烷，溶解残渣，并将其移人分液漏斗中，振摇，静置，分层，分出有机相；再用环己烷20 mL重复一次，合并有机相。向其中加入15 g无水NazS04，使有机相脱水于分液漏斗中，用环己烷补足至i00 mL。加5 mL浓H2S04，磺化，以下操作同①a法，取浓缩液2～5 gl。注人GC仪检N(N时做空A实验)。

③乳与乳制品：取50 g鲜乳样于分液漏斗中，加乙醇50 mI。，草酸钾0．5 g，振摇l min，加乙醚50 mL，摇匀，加环己烷50 mI。，振摇2 rain，静置，分层，弃下层。在有机相中，加15 g无水Naz804脱水于K—D浓缩器中，浓缩，残液为黄色透明油状物，加环己烷50 mL溶解残液，移人分液漏斗中，环己烷补足至100 mL。加浓HzS04 10 ml。，以下操作同①a法，取浓缩液2～5uI。注入GC仪检测(同时做空白实验)。

④粮食：取20 g粉碎的粮食样于具塞三角瓶中，加环己烷50 ml。，振荡30 rain，过滤于分液漏斗中，加环己烷至100 ml。。加lo mE，浓HzS04磺化，以下操作同①a法。取浓缩液2～5uL注入GC仪检测(同时做空白实验)。

⑤蔬菜、瓜果：取50 g匀浆的蔬菜瓜果样，加丙酮loo mL，振荡1 rnin，浸泡1 h，过滤。向滤液中加入环己烷100 mI．，振摇，加29／6 Nla2S04溶液200 mL，振摇，静置，分层，弃下层。有机相中加15 g无水Na2S04脱水，移人分液漏斗中，用环己烷补足至100 mL，加10 mL浓HzS04，磺化，以下操作同①a法。取浓缩液2～5uL注入GC仪检测(同时做空白实验)。

⑥动植物油：取10 g油样于分液漏斗中，加环己烷250 mL，溶解，振摇，加浓硫酸磺化，以下操作同①a法(同时做空白实验)。

6．标准曲线制备与检测

①外标峰面积标准曲线定量法：取六六六、滴滴涕标准应用液(0．01ug／ml。)，用苯稀释定容成不同浓度，分别注人5肚L于GC仪，以峰面积为纵坐标，农药含量为横坐标，分别绘制有机氯各同分异构体标准曲线。然后，将被检样品浓缩液也注入5肛I。，并在色谱图上量出峰高，再从标准曲线上查出对应的农药含量。

②内标峰面积标准曲线定量法：在已提取处理的样液中加入环氧七氯为内标物。从色谱图上量出内标物及各种农药的峰面积，求出各农药对内标物的峰面积比。以峰面积比对标准溶液浓度作图，分别绘制标准曲线。在检测样液时按上述加入环氧七氯为内标物检测，从标曲线上查得相当于所得峰面积比的溶液浓度，然后再换算成样品中农药含量。

7．分离效果及保留时间

9．说明

①无水NazSOt为样品脱水剂。

②环己烷或石油醚在本实验中作用是提取样品脂溶性有机氯农药残留。

③2％Na2S04为洗涤磺化时残留的极性物质。

④乙醚(无水)，丙酮为脂肪溶剂，在本实验中为提取试样脂肪。

⑤K2C204。乙醇在本实验中作用为破坏乳脂球的脂肪膜，有利于乳品种农药的提取。

⑥样品如为动物油、肥肉时，其提取样量为5 g；乳制品取样量按鲜乳折算；蛋与蛋制品10个鲜蛋去壳，混匀后再取样，蛋制品取样按鲜蛋折算。

⑦蛋样在用丙酮处理后蒸除时，在浓缩过程中，溶液变粘稠，常有泡沫，应小心不让其溢出。

⑧色谱柱只能选用玻璃柱，如选用不锈钢柱时，其有机氯农药残留物会对金属壁产生催化分解及吸附现象，干扰检测。

⑨色谱柱装填已涂渍好固定液担体的操作必须认真，特别注意填充均匀、紧密，不应留有间隙或死空间。更不可损坏担体，以免改变柱的效能。填毕，NNNN_kNNNN~Ng。然后在略高于操作时的柱温下持续老化36~48 h。

⑩气相色谱法是我国食品卫生检验标准第一法。本法具有快速、灵敏、简便、准确和分离能力高的特点，并能将六六六、滴滴涕各异构体分离，准确定量。本法最低检测限10—11～101。g。在一般情况以外标法(标准液系列)简便易行，而内标法(加人内标物，如环氧七氯)会产生由仪器响应改变而引起的误差和进样误差。方法回收率，。一BHC 88％～95％，7-BHC97％～106％，fl-BHC 85％~101％，&BHC 94~101％，P，P’一DDE 97％~101％，P，P，一DDT100％～102％。