近日,中国刑事警察学院和辽宁刑事科学技术研究所共同发表了中国大陆首家MiSeq FGx法医专用系统的综合测评数据。文章发表在Forensic Science International: Genetics 31 (2017) 135-148。
郭飞博士和他的团队使用ForenSeq DNA Signature试剂盒,在MiSeq FGx 法医专用系统上,一次运行可检测超过200个法医专用位点。这些位点包括:27个常染色体STR位点 (A-STRs),7个X染色体STR位点(X-STRs),24个Y染色体STR位点(Y-STRs),以及94个用于身份信息识别的单核苷酸多态性位点(iSNPs)。 除此之外,还可以选择性检测22个表型特征SNPs (pSNPs)和56个地理先祖特征SNPs (aSNPs)。
作者在本次研究中,通过3个部分对MiSeq FGx系统进行了验证
1.方法学优化:包括DNA提取,样本定量、文库标准化、文库浓度稀释,以及Flowcell上样量调整
2.MPS性能测试:包括测序覆盖深度、序列覆盖比例,和位点覆盖比例
3.ForenSeq试剂盒性能测试:包括重复性和一致性,灵敏度,混合样品检测,稳定性,和案件样本检测。
结果显示
基于qPCR的样本定量、文库标准化、Flowcell上样、检测合适的样本数量,以及Flowcell上样文库的浓度,这些因素都较大程度的影响MPS的结果表现和结果重复性。
ForenSeq试剂盒的重复性和结果分型一致性表现优异。
起始DNA量≥ 100 pg,可以得到全部的STR分型,起始DNA量≥ 200 pg,可以得到全部的SNP分型。
当样本中存在≥ 5%低含量混合时,由于等位基因测序覆盖比例不平衡,样本可被软件分析为混合样本。在有已知分型的基础上,9:1到1:9之间的混合样品可以容易的获得其中低含量样本的全部分型。
ForenSeq试剂盒可以耐受≤ 200 µM血红素,≤ 50 µg/ml腐殖酸。在≥ 200-bp降解样本中可以获得> 56% STR分型和> 88% SNP分型。这一点对于案件样本非常重要。
总体来说,郭飞博士和他的团队认为,ForenSeq试剂盒是一款信息量强大、结果表现良好、性能稳定、重复性极佳的产品,它完全能够满足法医鉴定的需求。并且,在ForenSeq UAS法医专用分析软件中,灵敏的QC监测,自动的样品比对功能,对样品分析都是非常有帮助的。这样,我们就可以避免繁琐而耗时的无为劳动,把注意力集中在软件提示有问题的基因型上,从而最大限度地节省数据分析的时间。
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