艰难梭菌(Clostridium difficile,CD)是一种产毒素的专性厌氧革兰阳性芽孢菌,广泛分布于人和动物的肠道及环境中。因其对氧极为敏感,在传统培养基上分离培养较困难,故命名为艰难梭菌。
在过去的十年里,艰难梭菌感染的频率和严重程度在世界范围内不断增加,成为引起抗生素相关性腹泻和院内感染的主要病原菌之一。2013年和2019年美国CDC《抗生素耐药威胁报告》将艰难拟梭菌列为紧急威胁的耐药菌。
艰难梭菌感染的危险因素:
·抗生素使用(2-3月使用以上)
·住院(2-3个月长期住院)
·高龄(>65岁)
·鼻饲管和胃肠道治疗
·胃酸抑制药物-质子泵抑制剂和组胺2(H2)受体拮抗剂
·免疫抑制状态
·炎症性肠病
·胃肠道手术
近年来,我国部分地区已检测出高毒力株,表明艰难梭菌感染(Clostridium difficile infection,CDI)已对我国临床构成了威胁。同时,研究表明我国的CDI分子流行病学特征具有自身特点,使得CDI的防控形势十分严峻。因此,临床快速、准确诊断CDI,对改善患者预后及节省我国医疗支出具有重要意义。
2017年我国发布了《中国成人艰难梭菌感染诊断和治疗专家共识》,将艰难梭菌感染诊断标准更新为:患者出现中至重度腹泻或肠梗阻,并满足以下任一条件:(1)粪便检测CD毒素或产毒型CD结果阳性;(2)内镜下或组织病理检查显示伪膜性肠炎。
目前,艰难梭菌的检测方法可分为实验室检测和临床诊断策略。实验室检测主要为菌株检测、毒素的核酸检测和毒性检测。
菌株检测中,厌氧培养法费用较低、操作简单,但仍需生物化学反应鉴定且无法判定是否为产毒株,因此后续可通过PCR法或MALDI-TOF MS两种技术对典型的艰难梭菌菌落进行鉴定。
2019年发布的《MALDI - TOF MS在临床微生物鉴定中的标准化操作专家共识》为临床微生物的高效鉴定提供了规范性指导。目前,国内已有实验室使用MALDI-TOF MS技术对经培养法获得的艰难梭菌疑似菌株进行准确鉴定,提升了临床实验室鉴定艰难梭菌的水平及效率。
虽然目前艰难梭菌的检测方法有多种,但粪便培养仍然是艰难梭菌检测的金标准。在得到纯培养的菌株后,后续还对培养后的菌株进行毒素分型、分子分型,并检测其耐药性,方便临床根据耐药性结果给患者对症下药,减少抗生素滥用风险。除此之外,还能够研究其传播能力(如芽孢形成、黏附能力等)与传播进化机制,预防疾病的传播。
《艰难梭菌感染诊断(T/CPMA 008-2020)》
在艰难梭菌粪便培养培养时,需要先使用无水乙醇对粪便进行前处理,然后使用特殊的培养基CCFA或CDMN,严格厌氧培养48-72h。
传统培养方法:采用厌氧产气袋培养。但由于产气袋生成厌氧环境时间较长(40分钟以上),细菌暴露在有氧环境中的时间较长,导致艰难梭菌检出率偏低。
最新培养方案:如今用户可选择采用智能厌氧微生物培养系统,实现更加严格的厌氧培养环境。例如,浙江省疾病预防控制中心,配合采用了DW-100A-K智能厌氧微生物培养系统,厌氧环境的生成时间大幅缩短,避免样本长时间暴露在有氧环境中,且生成气体环境严格,大大提高了艰难梭菌检出率。
DW-100A-K系列 智能厌氧微生物培养系统
仪器服务于各类厌氧菌微需氧菌和嗜二氧化碳菌的培养、检验,可根据需要选择特定氧气浓度(0%-15%可选)和CO2浓度(5%-15%可选)。仪器能快速生成环境,微需氧最快约2 min,厌氧最快约4 min,仪器稳定可靠,确保重现性100%。
设备自带五级自检质控(气体输入气压检测、罐体连接性检测、罐体泄漏性检测、罐体密封性检测、催化剂活性检测),确保培养罐气密性,严格保障厌氧环境。
产品优势:
1、 一机多用:厌氧、微需氧和嗜CO2培养;
2、 快速生成环境:微需氧、CO2最快2 min,厌氧最快4 min;
3、 脱机培养:培养罐可从仪器上卸载、独立控制,设置不同培养环境,培养过程完全密封,避免样本泄漏;
4、 罐体灵活配置:多种罐体可选,满足不同培养需求;
5、 QA质控软件:培养前5级质控检测,确保重现性100%。
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