蒽酮法测定植物组织中可溶性糖与淀粉

2016/11/18   下载量: 8

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应用领域 农/林/牧/渔
检测样本 其他
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参考标准 DB31/ 2010 食品安全地方标准 植物组织可溶性糖与淀粉蒽酮法

1.蒽酮乙酸乙酯试剂:取分析纯蒽酮1g,溶于50ml乙酸乙酯中,贮于棕色瓶中,在黑暗中可保存数星期,如有结晶析出,可微热溶解。   2.浓硫酸(比重1.84)。

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植物组织中可溶性糖与淀粉的测定

 

一、蒽酮法测定可溶性糖

 

【仪器与用具】

 

 分光光度计;电炉;铝锅;20ml刻度试管;刻度吸管5ml 1支,1ml 2支;记号笔;吸水纸适量。

 

【试剂】

 

 

 

1.蒽酮乙酸乙酯试剂:取分析纯蒽酮1g,溶于50ml乙酸乙酯中,贮于棕色瓶中,在黑暗中可保存数星期,如有结晶析出,可微热溶解。

 

2.浓硫酸(比重1.84)。

 

【方法】

 

 

 1.标准曲线的制作

 

 

20ml刻度试管11支,从010分别编号,按表24-1加入溶液和水。各试管加溶液水的量管号 然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液,摇匀,再从管液正面快速加入5ml浓硫酸,摇匀。比色液总体积为8ml,在恒温下放置30min,显色。然后以空白为参比,在485nm

波长下比色测定,以糖含量为横坐标,光密为纵坐标,绘制标准曲线,求出标准直线方程。

 

按表1加入标准的蔗糖溶液,然后按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸,充分振荡,立即将试管放入沸水浴中,逐管均准确保温1min,取出后自然冷却至室温,以空白作参比,在630nm波长下测其光密度,以光密度为纵坐标,以糖含量为横坐标,绘制标准曲线,并求出标准线性方程。

 

2.可溶性糖的提取

 取新鲜植物叶片,擦净表面污物,剪碎混匀,称取0.100.30g,共3份,或干材料。分别放入3支刻度试管中,加入510ml蒸馏水,塑料薄膜封口,于沸水中提取30min(提取2次),提取液过滤入25ml容量瓶中,反复冲洗试管及残渣,定容至刻度。

 

3.显色测定

 

 吸取样品提取液0.5ml20ml刻度试管中(重复2次),加蒸馏水1.5ml,以下步骤与标准曲线测定相同,测定样品的光密度。

 

4.计算可溶性糖的含量

 

可溶性糖含量(mg/g)=310WnaV式中C-标准方程求得糖量(μg)a-吸取样品液体积(ml)V-提取液量(ml)-稀释倍数W-组织重量(g)。

 

四、淀粉含量的测定

 

【仪器与用具】

 

电子天平;容量瓶:100ml×450ml×2

 

漏斗;小试管若干支;电炉;刻度吸管0.5ml×12.0ml×35ml×4;分光光度计;记号笔。

 

【试剂】

 

 

 

 

 

1)浓硫酸(比重1.84);

 

29.2mol/L HClO4

 

32%蒽酮试剂:同蒽酮法(或9%苯酚,同方法一);

 4)淀粉标准液:准确称取100mg纯淀粉,放入100ml容量瓶中,加6070ml热蒸馏水,放入沸水浴中煮沸0.5h,冷却后加蒸馏水稀释至刻度,则每ml含淀粉1mg,吸取此液5.0ml

,加蒸馏水稀释至50ml,即为每ml含淀粉100μg的标准液。

 

【方法】

 

 

 

 

 

1.标准曲线制作取小试管11支从010编号,按表2加入溶液和蒸馏水。以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可,绘制相应的标准曲线

 

2.样品提取

 将提取可溶性糖以后的残渣,移入50ml容量瓶中,加20ml热蒸馏水,放入沸水浴中煮沸

15min,再加入9.2mol/L高氯酸2ml提取15min,冷却后,混匀,用滤纸过滤,并用蒸馏水定容(或以2500r/min离心10min)。

 

3.测定

 

 可采用苯酚法或蒽酮显色法测定。

 按下式计算淀粉的含量。淀粉水解时,在单糖残基上加了1分子水,因而计算时所得的糖量乘以0.9才为扣除加入水量后的实际淀粉含量。淀粉含量(%=100106WaVC式中C-标准曲线查得的淀粉含量(μg); V-提取液总量(ml);a-显色时取液量(ml);

 

W-样品重(g)。

 

注:淀粉水解完全度试验样品测定中可同时作1份用于淀粉水解完全度检验的样品,在酸解过滤后,将其残渣加上2ml水,搅拌均匀,吸2滴于白瓷盘上,加2I2-KI溶液,显微镜下观察,若出现紫蓝色颗粒,证明水解不完全,其正式测试样品需再加高氯酸水解,直至不出现蓝紫色为止.

 

 

 

 

 

 

 

                              

 

                                                     得利特北京科技有限公司

 

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