资料摘要
资料下载说到免疫印迹最重要的就是抗体的选择了。在免疫印迹中我们会用到一抗和二抗等抗体,本文着重给大家介绍一下一抗的选择。 一抗就是能和特异性抗原特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。抗体因其种属来源不同可以分为多种类型,如鼠抗,兔抗,羊抗等等,那么在使用时我们应该怎么选择呢? 检测任何一种目的蛋白都有不止一种抗体可供选择,为了在试验过程中尽快找到最适合的抗体,往往需要考虑以下几种因素: 1.确定自己的实验类型。如WB、IHC、ICC、ELASA等。一般的抗体说明书上都会给出该抗体适用于哪一种分析类型。 2. 单克隆or多克隆抗体的选择。一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异性稍弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高,但极易出现非特异性条带。 3.确定自己的实验样本的结构信息。不同的抗体是由不同的免疫原(全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体或细胞等)免疫宿主而制备得来,抗体说明书一般都有免疫原的描述,如果检测的样本是蛋白片断或蛋白全长的某一区域,则必须选择用含此片段结构域的免疫原制备出的抗体。还有一点就是样本的制备过程,有些抗体要求样本经过某些特殊处理,比如将样本还原和变性等,还有一些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。 4.抗体信息的确认。这一点虽然不是技术方面的限制因素,但对于结果还是会有很大影响的。当我们拿到抗体时,一定要仔细确定抗体的名字,别名、亚型等信息,千万不要因为这些小细节导致我们的实验毁于一旦。 当然选择了正确的抗体之后,要想有高质量,满足期刊杂志发表的图片,还需要有高品质的成像仪来保驾护航。美国Azure多功能分子成像系统,全新升级,为您的实验护航。
多重PCR技术要点解析
简介:多重PCR要求在同一反应体系内对多个位点进行特异性扩增。因而引物间的配对与竞争性扩增均会影响扩增效果。如果能选择合适的反应体系、反应条件以及更合适的PCR仪,则有望提高多重PCR的扩增效果。所以在进行多重PCR的时候,不应墨守成规,要根据自身实验情况对实验条件进行不断优化,达到最佳扩增效果。
qPCR体系优化和常见问题分析
简介:qPCR实验的工作流程首先需要确定研究的目的,根据实验设计规划好实验分组、重复次数等细节。接下来分为样本准备和引物探针验证两个重要的步骤。样本准备主要是核酸提取逆转录等步骤,引物探针需要去测试特异性和效率。接下来需要使用qPCR仪来对样品中的目的核酸进行扩增qPCR结束后根据实验目的对目的核酸进行相对或者绝对定量。
荧光定量PCR实验,荧光标记怎么选?
简介:荧光定量PCR技术是将常规的PCR和荧光检测技术相结合,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,以此实现对初始模板的定量分析。荧光定量PCR技术作为当今生物学研究的重要手段之一,在基础科学、生物技术、医学研究、法医学、诊断学等多方面具有广泛的应用前景。
ECHO REVOLVE显微镜在环境镉、细菌和宿主相互作用研究中的应用
简介:本研究使用ECHO REVOLVE正倒置一体荧光显微镜(RVL-100-G,Discover ECHO,US)检测VS29蠕虫的GFP荧光。激发和检测波长分别为470–495 nm和510–550 nm。使用图像处理和分析软件对荧光图像进行分析,计算其平均荧光密度。
如何处理实时荧光定量PCR数据
简介:Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统融合了高品质Peltier温度模块和基于光纤传输的光学检测系统,为您的科学研究提供高精准、高灵敏的可靠结果。Azure Cielo 3/6检测通道,可根据实验需求灵活配置。同时配有10.3触控系统,主机本身可独立运行、连接、远程交互,让您随时随地知悉实验进程和及时获得实验结果。
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