一文教你如何在Western Blot中选择一抗？

2019-11-18 10:55 下载量：0

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说到免疫印迹最重要的就是抗体的选择了。在免疫印迹中我们会用到一抗和二抗等抗体，本文着重给大家介绍一下一抗的选择。一抗就是能和特异性抗原特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。抗体因其种属来源不同可以分为多种类型，如鼠抗，兔抗，羊抗等等，那么在使用时我们应该怎么选择呢？检测任何一种目的蛋白都有不止一种抗体可供选择，为了在试验过程中尽快找到最适合的抗体，往往需要考虑以下几种因素： 1.确定自己的实验类型。如WB、IHC、ICC、ELASA等。一般的抗体说明书上都会给出该抗体适用于哪一种分析类型。 2. 单克隆or多克隆抗体的选择。一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但极易出现非特异性条带。 3.确定自己的实验样本的结构信息。不同的抗体是由不同的免疫原（全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体或细胞等）免疫宿主而制备得来，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果检测的样本是蛋白片断或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段结构域的免疫原制备出的抗体。还有一点就是样本的制备过程，有些抗体要求样本经过某些特殊处理，比如将样本还原和变性等，还有一些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。 4.抗体信息的确认。这一点虽然不是技术方面的限制因素，但对于结果还是会有很大影响的。当我们拿到抗体时，一定要仔细确定抗体的名字，别名、亚型等信息，千万不要因为这些小细节导致我们的实验毁于一旦。当然选择了正确的抗体之后，要想有高质量，满足期刊杂志发表的图片，还需要有高品质的成像仪来保驾护航。美国Azure多功能分子成像系统，全新升级，为您的实验护航。

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文献贡献者

艾普拜生物科技（苏州）有限公司

白金会员 | 第8年

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