资料摘要
资料下载在此次的新型冠状病毒疫情中,核酸检测作为确诊的金标准发挥着重要的作用。众所周知,本次新冠病毒的核酸检测流程为采样(咽拭子、肺泡灌洗液),提取病毒RNA,再经过RT-qPCR或者一步法RT-数字PCR检测样本。但近期关于核酸检测准确性的讨论也甚嚣尘上,其中PCR实验污染是导致实验有偏差的原因之一, 造成PCR实验污染的主要原因有以下几点,样本间交叉污染(样本泄漏引起的交叉,样本提取过程中移液器、耗材的污染),PCR试剂的污染(容器、耗材、移液器,水等被污染),PCR扩增产物污染,气溶胶污染,克隆质粒污染等。 在病毒核酸检测过程中,结果的准确性除了检测方式的灵敏度很重要以外,保证提取RNA样本的完整性也十分重要。今天我们就聊聊如何防止RNA降解,获得高质量的RNA进行后续试验。导致RNA降解最主要的物质就是RNase,RNase非常稳定,且无处不在,用常规的高温高压蒸汽方法和蛋白酶抑制剂不能使所有的RNase完全失活。
多重PCR技术要点解析
简介:多重PCR要求在同一反应体系内对多个位点进行特异性扩增。因而引物间的配对与竞争性扩增均会影响扩增效果。如果能选择合适的反应体系、反应条件以及更合适的PCR仪,则有望提高多重PCR的扩增效果。所以在进行多重PCR的时候,不应墨守成规,要根据自身实验情况对实验条件进行不断优化,达到最佳扩增效果。
qPCR体系优化和常见问题分析
简介:qPCR实验的工作流程首先需要确定研究的目的,根据实验设计规划好实验分组、重复次数等细节。接下来分为样本准备和引物探针验证两个重要的步骤。样本准备主要是核酸提取逆转录等步骤,引物探针需要去测试特异性和效率。接下来需要使用qPCR仪来对样品中的目的核酸进行扩增qPCR结束后根据实验目的对目的核酸进行相对或者绝对定量。
荧光定量PCR实验,荧光标记怎么选?
简介:荧光定量PCR技术是将常规的PCR和荧光检测技术相结合,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,以此实现对初始模板的定量分析。荧光定量PCR技术作为当今生物学研究的重要手段之一,在基础科学、生物技术、医学研究、法医学、诊断学等多方面具有广泛的应用前景。
ECHO REVOLVE显微镜在环境镉、细菌和宿主相互作用研究中的应用
简介:本研究使用ECHO REVOLVE正倒置一体荧光显微镜(RVL-100-G,Discover ECHO,US)检测VS29蠕虫的GFP荧光。激发和检测波长分别为470–495 nm和510–550 nm。使用图像处理和分析软件对荧光图像进行分析,计算其平均荧光密度。
如何处理实时荧光定量PCR数据
简介:Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统融合了高品质Peltier温度模块和基于光纤传输的光学检测系统,为您的科学研究提供高精准、高灵敏的可靠结果。Azure Cielo 3/6检测通道,可根据实验需求灵活配置。同时配有10.3触控系统,主机本身可独立运行、连接、远程交互,让您随时随地知悉实验进程和及时获得实验结果。
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