如何确定数字PCR的LOB?

艾普拜生物科技（苏州）有限公司

2019/05/27 10:47

数字PCR技术是一项新的核酸检测和定量技术。空白检测限LOB （Limit of Blank）是判断数字PCR技术检测能力的重要参数。

LOB（the limit of blank）是一项统计学实验参数。在可信度大于95%的概率下，对于不含有分析物的样品（空白样品），LOB是可能观察到的最高检测结果。换句话说就是最大的假阳性数。

为什么要在数字PCR中计算LOB ?

在数字PCR (dPCR)中，多种因素可以引起假阳性。定量核酸时确定假阳性的cutoff对dPCR检测的稳定性至关重要。为了定义这个cutoff，检测阈值通常设置在LOB值之上，而在检测校准期间必须首先为每个目标确定空白LOB值。此外，实验LOB值对于判断反应是正还是负以及计算LOD值都是必要的。

95%置信度LOB如下表所示：

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R：重复次数，一般≧30

μ和α：分别为假阳性个数的平均值和标准方差

μ_corr：校正平均值

当μ=0（即假阳性永远不会出现），则LOB（95%）=0

当LOB为非零时，可以用概率分布加权的“减去假阳性”的方法来校正实验样品中目标核酸的量。

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