数字PCR技术是一项新的核酸检测和定量技术。空白检测限LOB (Limit of Blank)是判断数字PCR技术检测能力的重要参数。
LOB(the limit of blank)是一项统计学实验参数。在可信度大于95%的概率下,对于不含有分析物的样品(空白样品),LOB是可能观察到的最高检测结果。换句话说就是最大的假阳性数。
为什么要在数字PCR中计算LOB ?
在数字PCR (dPCR)中,多种因素可以引起假阳性。定量核酸时确定假阳性的cutoff对dPCR检测的稳定性至关重要。为了定义这个cutoff,检测阈值通常设置在LOB值之上,而在检测校准期间必须首先为每个目标确定空白LOB值。此外,实验LOB值对于判断反应是正还是负以及计算LOD值都是必要的。
95%置信度LOB如下表所示:
R:重复次数,一般≧30
μ和α:分别为假阳性个数的平均值和标准方差
μcorr:校正平均值
当μ=0(即假阳性永远不会出现),则LOB(95%)=0
当LOB为非零时,可以用概率分布加权的“减去假阳性”的方法来校正实验样品中目标核酸的量。
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