什么是免疫荧光技术?
免疫荧光技术(Immunofluorescence technique)又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种。
免疫荧光方法中主要步骤:
1)冰冻切片制备 2)组织切片固定3)血清封闭 4)一抗孵育条件
5)二抗孵育条件 6)复染 7)封片 8)切片清洗
荧光显微镜标本制作要求:
1、载玻片:载玻片厚度应在0.8~1.2mm之间,载玻片必须光洁,厚度均匀,无明显自发荧光,有时需用石英玻璃载玻片。
2、盖玻片:盖玻片厚度在0.17mm左右,光洁。
3、标本:组织切片或其他标本不能太厚,如太厚激发光大部分消耗在标本下部。另外,细胞重迭或杂质掩盖,影响判断。
4、封裱剂:封裱剂必须无自发荧光,无色透明,荧光的亮度在pH8.5~9.5时较亮,不易很快褪去。
5、镜油:必须使用无荧光镜油。
荧光玻片如何来检测呢?
荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源,经过滤色系统发出一定波长的光(如紫外光365nm或紫蓝光420nm)作为激发光、激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后,再通过荧光显微镜来观察。
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