导读
目前国内市场上销售的热启动Taq酶的品牌很多,但真正高质量的热启动Taq酶并不多,面对这么多的热启动Taq酶产品,我们应如何选择?
首先,选择扩增效率高的热启动Taq酶
耐受性好的Taq酶反应体系经优化后,扩增效率在95%以上,即使是在目标基因含量较低时也能够获得满意的扩增,在模板量较高时,也不易中毒,指数扩增期较长。耐受性能较差的Taq酶,即使反应体系经多次优化,扩增效率仍达不到90%,扩增曲线“S”型不明显,斜率较小,曲线低平。模板量较低时扩增不出来,较高时扩增效果也不理想。所以PCR扩增效率与Taq酶的性能密切相关,选择高扩增效率的DNA聚合酶对PCR、qPCR能否成功至关重要。
其次,选择酶动力强的热启动Taq酶
Taq酶的酶动力与扩增效率有关。一般热启动Taq酶的酶动力越强,PCR扩增的指数增长期越长,‘S型’曲线更加典型,荧光信号值更高,而且更适合做多重PCR检测。酶动力弱的品牌DNA聚合酶一般只能支持2重反应,在做3重反应时,扩增曲线低矮,荧光信号值较低,无典型扩增曲线,结果很难判定。
最后,选择灵敏度高的热启动Taq酶
一般说,DNA聚合酶的扩增效率高,灵敏度就高,但也有不一致的情况。如果要扩增的样本目标基因丰度较低,建议对Taq酶的扩增灵敏度进行检测。
Taq酶的扩增灵敏度进行检测,常见的检测方法是将目标基因质粒片段进行10倍或5倍梯度稀释,在较低的几个稀释度进行PCR检测,选择检测灵敏度较高的热启动Taq酶。
由此可见,研究者需根据自己的实验要求和经费情况进行选择,最好做一个梯度稀释扩增实验,以检测热启动Taq酶的扩增效率和灵敏度。
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