方案摘要
方案下载| 应用领域 | 医疗/卫生 |
| 检测样本 | 上皮脱落细胞 |
| 检测项目 | |
| 参考标准 | 无 |
任何实验都需要数据归一化才能得出有效结论，尤其是涉及样品数量差异时。对于使用安捷伦 Seahorse XF 技术的实时细胞代谢分析，每孔细胞数是数据归一化普遍接受的参考值。该值可以通过细胞计数直接评估，也可通过测量生物分子（如总蛋白或基因组 DNA）间接评估。安捷伦 Seahorse XF 成像和归一化系统集成了 XF 技术与Cytation 1/5 细胞成像多模式酶标仪 (BioTek Instruments,Inc)。在此配置中，Cytation 1/5 由全新安捷伦 Seahorse XF 成像和细胞计数软件控制，该软件为基于显微图像的细胞计数提供了简单且经过验证的自动化解决方案。该一站式解决方案包括 1) 原位注入可渗透细胞膜的核染色化合物（即 Hoechst 33342），2) 针对 XF 分析优化的自动化成像和细胞计数，以及 3) 在 Wave 软件中将图像和细胞计数同步到 XF结果文件中。该解决方案为 XF 分析仪用户提供了一种高效可靠的归一化方法以及无缝式快速工作流程。
归一化验证
RAW264.7、HT29 和 SKOV3 细胞在补充了 10% FBS (HyClone,
SH30070.03)、2 mmol/L L-谷氨酰胺 (Corning, 25-005-CI) 和
1 mmol/L 丙酮酸钠 (Corning, 25-000-CI) 的高浓度葡萄糖
DMEM (Gibco, 11960-44) 基础生长培养基中培养。将 A549 细
胞在补充了 10% FBS 和 2 mmol/L GlutaMAX (Gibco, 35050-
061) 的 DMEM:F12 (Corning, 10-090-CV) 基础生长培养基中
培养。将 MCF7 细胞在含有 10% FBS 和 1 mmol/L 丙酮酸钠
的 RPMI-1640 (Gibco, 21870) 中培养。将 HepG2 细胞在补充
了 10% FBS、2 mmol/L GlutaMAX 和 1 mmol/L 丙酮酸的低
浓度葡萄糖 DMEM (Gibco, 11885-084) 中培养。对于 XF96，
以五种不同细胞密度接种细胞，其涵盖范围为建议细胞密度的
±50%；HepG2 为 1 × 104 个细胞/孔，A549、HT29、MCF7 和
SKOV3 为 2 × 104 个细胞/孔，RAW264.7 为 3 × 104 个细胞/
孔。对于 XF24，以三种不同细胞密度接种细胞，涵盖范围为
±25%；HepG2 为 2 × 104 个细胞/孔，A549 和 MCF7 为 4 ×
104 个细胞/孔。
将细胞培养过夜，按照标准安捷伦 Seahorse XF 细胞能量代谢
表型测试方案1 测量代谢表型，其中对方案作出以下修改：将
20 μmol/L Hoechst 33342 (Thermo, 62249) 加入寡霉素/FCCP
混合物中。通过 BioTek Cytation 1/5 使用 XF 细胞成像和计数
软件2 对细胞计数，在 Wave 软件中将数据归一化。使用安捷
伦 Seahorse XF 细胞能量代谢表型报告生成器比较归一化后的
数据变化3。
使用不含酚红的安捷伦 Seahorse XF 基础培养基（安捷伦科
技公司，103335-100）中的细胞进行所有 XF 分析，该培养基
补充了 10 mmol/L 葡萄糖、2 mmol/L L-谷氨酰胺、1 mmol/L
丙酮酸钠和 5 mmol/L HEPES，pH 7.4（安捷伦科技公司，
103337-100）。
文献贡献者
安捷伦 Seahorse XF 分析试剂盒与试剂
干细胞研究Agilent Seahorse XF 活细胞代谢分析解决方案
Agilent Seahorse XFp 分析仪从有限的样品得到代谢功能数据
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