探究人源葡萄糖转运蛋白的外表面抑制剂分子机制

2022/08/17   下载量： 1 次

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应用领域 生物产业
检测样本 其他
检测项目 表征
参考标准 MST

颜宁团队与清华大学Jiang Xin团队通过晶体结构解析，对GLUT家族蛋白与抑制剂之间的相互作用进行了深入的探究，并结合Monolith分子互作检测阐明了抑制剂SA47的作用方式，为发现用于治疗开发的 GLUTs 表面抑制剂提供了分子基础。

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方案标题：探究人源葡萄糖转运蛋白的外表面抑制剂分子机制

检测样品：葡萄糖转运蛋白GLUT3与小分子抑制剂SA47

检测项目：蛋白与小分子结合位点验证

应用领域： 生物

 

方案摘要：

颜宁团队与清华大学Jiang Xin团队通过晶体结构解析，对GLUT家族蛋白与抑制剂之间的相互作用进行了深入的探究，并结合Monolith分子互作检测阐明了抑制剂SA47的作用方式，为发现用于治疗开发的 GLUTs 表面抑制剂提供了分子基础。

方案详情:

为了筛选和验证GLUT3 的外表面抑制剂，研究团队设计了一种GLUT3的变体— GLUT3exo。然后使用Monolith分别检测了GLUT3exo与内面抑制剂CCB和外表面抑制剂phloretin的结合能力，证实GLUT3exo与CCB无结合，选择性的结合至phloretin，且亲和力与WT GLUT3接近，从而证明GLUT3exo可作为检测GLUTs的外表面抑制剂的工具。

图片10.jpg

 

接下来，研究团队使用GLUT3exo来表征小分子抑制剂SA47对GLUT蛋白的结合作用。结果显示SA47与GLUT1，GLUT3的Kd值分别为309.5±58.2 nM和316.5±47.2 nM。

 

图片11.jpg

 

研究人员根据高分辨率的晶体结构信息，描述出SA47的不同芳香环和侧链位置与GLUT3对应的结合位点。为了验证这些互作结合位点，研究人员对GLUT3上的配体结合残基进行了系统性的Ala取代，并对蛋白产量和行为与WT相似的单点突变体与SA47的亲和力进行了检测。

 

 


图片13.jpg


如上表，研究人员分别检测了SA47与超过10个GLUT3蛋白WT和突变体的亲和力，验证了晶体结构显示的互作位点。Monolith分子互作仪检测一对亲和力仅需10min，检测不依赖于分子量变化，非常适合于小分子互作的检测。并且仪器没有微流控系统，无需清洗维护。

 

仪器链接 https://www.instrument.com.cn/netshow/C438212.htm


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