色谱柱是液相色谱的核心部件之一,主要起到分离作用。分析实验结果的好坏,和色谱柱的选择以及当时柱子的状态可是有着很大的关系哦!所以在平时使用好和维护好它那是相当重要的。
色谱柱的类型按材质或者机理可以分有多种,不同的色谱柱使用的条件和要求也会不一样,各位读者大大要记得看说明书哦!一般的实验室都会配有反相C18的色谱柱,因为该种柱子的应用最为广泛,所以小编这里就以大家最常用的反相色谱柱为例进行介绍,看看我们在平时使用时有哪些知识点和注意事项!!
色谱柱柱效测试
赛默飞生产的反相色谱柱出厂时都有经过柱效测试,所用化合物为茶碱、邻二甲苯,对硝基苯胺、苯甲酸甲酯和二甲苯。(如有不同,以柱效报告为准)。
在条件允许情况下,请参考COA报告中的条件,对新色谱柱进行柱效测试。
色谱柱安装
请小心操作色谱柱。
不要摔、碰色谱柱,这样会损坏色谱柱床,使色谱柱性能下降。
使用合适的连接管路和接头,确保色谱柱连接处死体积降到最低(使用不锈钢接头时需尤其注意)。我们建议使用Viper接头,此接头与Thermo色谱柱以及其他品牌色谱柱均完美匹配。
色谱柱活化平衡
在进行分析之前,请使用不含盐的流动相平衡柱子20倍柱体积,以使色谱柱达到平衡。
色谱柱的柱体积可以通过以下公式估算:
V=0.68 π (r/2)2L
V 为色谱柱柱体积(mL),r 为色谱柱内径(cm),L 为色谱柱长度(cm)。
色谱柱保护
对于“脏”的样品以及组分未知的样品,请尽量使用在线过滤器或保护柱,如果可能,请使用SPE小柱对样品进行前处理。上述做法可以有效延长色谱柱使用寿命。
色谱柱使用温度
硅胶基质色谱柱使用温度一般应低于60℃。
色谱柱清洗
u 常规清洗
1. 请使用至少20倍柱体积的含有≥30水的极性有机溶剂(如乙腈)作为流动相以除去柱子中的缓冲盐。
2. 使用至少20倍柱体积的含有95%极性有机溶剂(如乙腈)清洗柱子。
u 污染物的去除
常规清洗后柱效没有明显恢复时,使用50%异丙醇/乙腈以低流速(不要超过色谱柱的最大耐受压力)清洗20倍的柱体积以去除污染物。
色谱柱保存
清洗完成后,将反相色谱柱保存在高比例的有机相中(推荐80%有机相20%水)。
注意:如果违反上述规程,可能使色谱柱失去保修。
色谱柱常见问题及解决方案建议
一、柱头塌陷(峰拖尾、分叉)
可能原因及解决方案:
Ø 骤然高压
开关机走流速梯度
Ø 硅胶降解
请在色谱柱pH耐受范围内使用
二、柱头污染(峰拖尾、肩峰、峰分裂、杂质峰)
可能原因及解决方案:
Ø 样品引入污染物
进行样品前处理步骤
Ø 流动相引入污染物
使用色谱纯的试剂和盐,上机前过滤
Ø 仪器管路引入污染物
使用适当溶剂冲洗仪器管路,增加保护柱或在线过滤器
三、柱压高
可能原因及解决方案:
Ø 柱头筛板堵塞
低流速不接检测器反冲
Ø 柱头污染严重
使用清洗再生办法冲洗
Ø 仪器管线堵塞
使用适当溶剂冲洗仪器管路
Ø 色谱柱粒径太小
选择小粒径色谱柱时要考虑仪器的耐压
Ø 流动相粘度过高
使用粘度较低的溶剂或适当升高柱温
Ø 盐沉淀或析出
保证流动相的兼容性
重要的事情说三遍:请看说明书!请看说明书!请看说明书!
若上述内容与色谱柱说明书不一,均以说明书为准。
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