人体犹如一座极为复杂的化工厂,不断地进行着各种生化反应。其反应与酶的催化作用有密切关系。酶发挥其活性,必须有辅酶参加。已知许多维生素是酶的辅酶或者是辅酶的组成分子。因此,维生素是维持和调节机体正常代谢的重要物质,缺乏相应的维生素,身体表征也会有所不同。
高效液相色谱HPLC 维生素分析系统
01 维生素分析原理
一直到20世纪90年代初,人们还认为碳水化合物,蛋白质,脂类,矿物质和水是正常生长,发育和维持生命所必需的唯一饮食成分。然而,仅饲喂上述膳食成分的动物经常异常生长,例如发育迟缓和发育迟缓,或者因明显的营养不良而死亡。许多国家的研究人员开始关注明显缺乏未知的膳食补剂,这似乎是维持动物健康所必需的。
1912年,波兰科学家C. Funk将这些特殊营养成分命名为“维他命”,其中“vita”意味着生活在拉丁语中,而“胺”则来自于从稻壳中分离出的硫胺素中的化合物。然而,其他科学家后来发现所有维生素都不含胺,最后通过去除维生素的最后一个字母“e”将Vitamine缩短为Vitamin。这是第一次对维生素命名。随着分析科学和医学技术的进步,越来越多的维生素被发现,人们开始用字母来区别不同的维生素,出现了维生素A、维生素B1等名称。
维生素分为两种,水溶性维生素和脂溶性维生素。“水溶性维生素”易溶于水而不易溶于非极性有机溶剂,吸收后体内贮存很少,过量的多从尿中排出。水溶性维生素包括维生素B1、核黄素(维生素B2)、烟酸、维生素B6、叶酸、泛酸、维生素B12、生物素等B族维生素和维生素C。“脂溶性维生素”易溶于非极性有机溶剂,而不易溶于水,可随脂肪为人体吸收并在体内储积,排泄率不高,脂溶性维生素包括有维生素 A、维生素D、维生素E、维生素K。
02 维生素分析系统
维生素分析系统是一种用于分析水溶性和脂溶性维生素的特殊分析仪。维生素不能由人体合成,因此,它们通常通过外部来源获得,例如我们吃的食物。维生素是不稳定的化合物,在样品制备过程中容易被氧化和破坏。因此,需要建立一种减少维生素降解的简单测定方法,以产生准确的结果。
通常,已经通过分光光度法和微生物学程序分析了的维生素,由于其复杂的样品制备程序以及冗长的过程,经常会导致重复性较差。最近,由于HPLC在分析维生素上的应用,这克服以上问题,并因此产生准确和可重复的结果。
03样品制备程序
水溶性维生素的样品制备程序
样品100g
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加入100毫升纯净水,使其均化10分钟
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用磷酸将pH调节至4.5
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加入250毫克菠萝蛋白酶或蛋白酶,加入2.0克α-淀粉酶
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将样品在45°C 下保温3小时
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将温度降至室温
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通过加入10ml 20%偏磷酸沉淀蛋白质
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在5℃下以10,000rpm离心30分钟
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重复蛋白质沉淀过程三次,加入纯净水使样品溶液达到100ml
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通过已用5.0ml甲醇清洗的C18 Sep-pak柱过滤样品
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用 7.0毫升1%磷酸和10.0毫升0.1N NaOH,以及3.0毫升甲醇:纯净水(1:1)溶液冲洗收集柱液
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收集所有溶液并将样品溶液加至100ml
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用0.25μm过滤膜过滤样品
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取10ul 样品进HPLC
脂溶性维生素的样品制备程序
样品 10g
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向样品中加入75ml 70%乙醇,25ml 17N NaOH和0.5g抗坏血酸
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在用氮气保护,在暗处静置样品过夜(约8~16小时)
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用正己烷萃取样品
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用水冲洗样品直至达到pH 7.0(通过添加pp检查溶液)
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将样品通过Sep-pak(氧化铝,二氧化硅,C18)柱后,用乙腈萃取样品
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将样品的最终体积定容为10ml
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立即用HPLC分析样品
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