小鼠周期素依赖性激酶抑制因子2A(CDKN2A)ELISA试剂盒

报价:¥1280
供货周期: 现货
品牌: LMAI Bio
型号: 96T/48T
货号: LM-CDKN2A-Mu
上海联迈生物工程有限公司
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小鼠周期素依赖性激酶抑制因子2A(CDKN2A)ELISA试剂盒适用于以下样本的测试:血清、血浆- 组织匀浆 腹水 细胞培养上清

产品名称:小鼠周期素依赖性激酶抑制因子2A(CDKN2A)ELISA试剂盒

简称:CDKN2A试剂盒

规格:96T/48T

检测范围:0.312-20ng/mL

检测限:0.108ng/mL

1.实验原理:本试剂盒采用竞争法检测样本中小鼠周期素依赖性激酶抑制因子2A(CDKN2A)的含量。向预先包被了抗体的酶标孔中加入样本,再加入生物素标记的识别抗原,在37℃下孵育30min,两者与固相抗体竞争结合形成免疫复合物,经PBST洗涤除去未结合的生物素抗原,然后加入亲和素-HRP,在37℃下孵育30min,亲和素-HRP与生物素抗原结合,洗涤后结合的HRP催化TMB(四甲基联苯胺)成蓝色,随后在酸的作用下转化成黄色,在450nm波长下有吸收峰,吸光值与样本中抗原的浓度成负相关。

2.试剂盒内容及其配制

3.试剂准备

a.使用前所有试剂应置于室温平衡至少30分钟。

b.本试剂盒可以直接加样,如浓度过高,可以进行适当比例的稀释(推荐2-5倍稀释),计算时应将结果乘以稀释的倍数。

c.洗涤液为25倍浓缩液,使用前将所有洗涤液倒入500ml或1L的烧杯中,用双蒸水定容到500ml即为工作液。

d.标准品的稀释:先用标准品/样品稀释液将标准品冻干粉定容到150μl,然后漩涡混匀30秒即为标准品原液(24小时内用完)。小鼠周期素依赖性激酶抑制因子2A(CDKN2A)ELISA试剂盒取5支干净的Eppendorf管,每管加150μl的标准品稀释液,分别标记上160ng/L,80ng/L,40ng/L,20ng/L ,10ng/L .取150μl标准品原液加入标记160ng/L 的管中,混匀后同样取出150μl,加入下一管,以此类推直至最后一管。零孔:直接加标准品/样品稀释液。(见下图)

e.生物素抗原的稀释:抽取生物素抗原稀释液1ml到浓缩型生物素抗原中,漩涡混匀15秒至冻干粉完全溶解,然后将所有液体移入稀释液瓶中,再次漩涡混匀30秒即为生物素抗原工作液。

f.亲和素-HRP的稀释:低速离心(使浓缩液全部沉到管底),将浓缩亲和素-HRP全部移入相应稀释液中然后漩涡混匀30秒即为亲和素-HRP工作液。

4.洗板方法

a.手工洗板:先洗去酶标孔中的的液体,在吸水纸上拍干,然后每孔加入300μl稀释好的洗涤液,轻轻摇晃30秒,然后甩掉,在吸水纸上拍干,重复4-5次。

b.洗板机洗板:洗板机洗板比较便捷,但应操作熟练后使用。

5.性能参数:

a.批内差:CV10%

b.批间差:CV12%

c.灵敏度:1ng/L

d.保存:    2-8

e.规格:    96T/

f.有效期:  6个月(2-8℃)。

6.详细操作程序

a.       小鼠周期素依赖性激酶抑制因子2A(CDKN2A)ELISA试剂盒使用前请先将试剂盒在室温下平衡半小时。

b.       空白孔不加样,只加显色剂AB和终止液用于调零。

c.       标准品孔:每孔加入稀释好的标准品50μl,零孔加入标准品/样品稀释液50μl,然后加入生物素抗原工作液50μl(零孔必须要做,并将其作为标曲的最后一个点)

d.       样品孔:加入样品50μl(推荐直接加样,浓度高可以用样品稀释液稀释2-5倍),然后加入生物素抗原工作液50μl

e.       轻轻摇晃,盖上封板膜,37℃培养箱中孵育30min

f.        25倍浓缩洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用。

g.       第一次洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

h.       加入50μl亲和素-HRP到标准品孔和样品孔中,轻轻摇晃,盖上封板膜,37℃培养箱中孵育30min

i.        第二次洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

j.        显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟。

k.       终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色).

l.        测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。

m.     计算:小鼠周期素依赖性激酶抑制因子2A(CDKN2A)ELISA试剂盒根据浓度和OD值算出标准曲线的回归方程,建议用专用计算软件进行计算,推荐使用ELISAcalc进行计算,拟合模型选用logistic曲线(四参数)。标曲示意图如下:

浓度

Blank

S5

S4

S3

S2

S1

S0

OD

VB

V5

V4

V3

V2

V1

V0

校准值

VB-VB

V5-VB

V4-VB

V3-VB

V2-VB

V1-VB

V0-VB

 



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