JM330感受态细胞|100μl|CAT#: LM2020-上海联迈生物工程有限公司

JM330感受态细胞

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供货周期：

现货

品牌：

LMAI Bio

规格：

100μl

货号：

CAT#: LM2020

CAS号：

产品详情

JM330感受态细胞

JM330 Chemically Competent Cell 产品说明书

产品规格（CAT#: LM2020）

JM330： 100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl

保存条件(保质期)： -80℃（6个月）

JM330感受态细胞基因型

F- φ80 lacZ?M15 ?(lacZYA-argF)U169 recA1 endA1 hsdR17(rk-, mk+) phoA supE44 λ-thi-1 gyrA96 relA1 tonA

产品说明

JM330菌株(即DH5α T1 Phage Resistant)，来源于DH5α菌株。在DH5α大肠杆菌基因组中引入tonA，赋予其抗噬菌体T1,T5的能力，即为JM330。JM330菌株最大的特点是其可以在体内特异性降解甲基化质粒模板，广泛应用于各种DNA定点突变试验中。JM330菌株缺失核酸内切酶 (endA1)和重组酶(recA1)，提高了质粒DNA的产量和质量； lacZΔM15的存在使JM330可用于蓝、白斑筛选。唯地生物开发的JM330感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>1×10⁹cfu/μg DNA。

JM330感受态细胞操作方法

1. JM330感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（例如：Dpn I消化产物等）并用手拨打EP管底混匀，冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏70分钟。

4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱至少15小时。

JM330感受态细胞注意事项

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。

2. JM330可以对未被Dpn I降解掉的质粒模板进行进一步的降解，因此可以保证定点突变具有更高的阳性率。

3. 转化高浓度的质粒或Dpn I消化产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

QQ图片20181128145241.png

同一批感受态细胞，用含目的片段的T载体质粒转化（阳性对照）能长出密密麻麻的菌落，而用另一种载体和目的片段的连接产物转化，却一个菌都没长出来，重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关，还是连接出了问题？哪个可能性大些？

答：应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照，确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。

感受态细胞放到-80冰箱了有半年了，还能用来转化质粒吗？

答：如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况，是可以用来转化的，但是由于冻存时间过长，转化效率会有所下降，如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的，如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。