F-BL21(DE3)感受态细胞

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供货周期: 现货
品牌: LMAI Bio
型号: 100μl
货号: CAT#: LM1002
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产品详情

F-BL21(DE3)感受态细胞

F-BL21(DE3) Chemically Competent Cell 产品说明书




产品规格 (CAT#: LM1002)

F-BL21(DE3):                                            100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

保存条件(保质期):                             -80℃(6个月) 



F-BL21(DE3)感受态细胞基因型


FomphsdSB(rBmBgal dcm(DE3)


F-BL21(DE3)感受态细胞产品说明

BL21(DE3)菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶,该区整合于BL21的染色体上,所以称为BL21(DE3)。可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。

F-BL21(DE3)感受态细胞经特殊工艺制作,无需42℃热激,37℃孵育步骤,只需冰浴,10min内完成转化、涂板操作,pUC19质粒检测转化效率可达1×10cfu/μg DNA。





 快速转化操作方法(10min


1. 提前10分钟将用到的筛选培养基平板拿到37℃预热。

2. F-BL21(DE3) 感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA并用手拨打EP管底轻轻混匀,冰中静置5分钟。

3. 用200 μl枪将感受态细胞-DNA混合物转移到已经37℃预热的LB培养基上,涂均匀,表面无水渍。

4. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。


快速热激转化操作方法(25min,可提高转化效率)




1. F-BL21(DE3)感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA并用手拨打EP管底轻轻混匀,,冰中静置5分钟。


2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟(晃动会降低转化效率)。加入700 μl不含抗生素的LB,37℃,200 rpm 复苏10分钟,涂板(均匀,表面无水渍)。




3. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。


F-BL21(DE3)感受态细胞注意事项


1. F-BL21(DE3) 感受态细胞也可进行热激操作,对于>7 kb质粒的构建,为了提高转化效率可按以下步骤操作:感受态细胞从-80℃拿出,插入冰中,5分钟后,加入目的DNA并用手拨打EP管底轻轻混匀,冰中静置10分钟。42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中静置2分钟。加入700 μl LB,37℃,200 rpm复苏30分钟,涂板。

2. F-BL21(DE3) 快速转化感受态细胞涂氨苄/羧苄青霉素抗性平板时效率较高,若涂卡那霉素或其他抗生素平板,转化效率下降(因无孵育步骤,卡那霉素等对菌体毒性较大)。若要提高卡那霉素或其他抗性质粒的转化效率,可按热激转化操作,增加孵育步骤。

QQ图片20181128145241.png

同一批感受态细胞,用含目的片段的T载体质粒转化(阳性对照)能长出密密麻麻的菌落,而用另一种载体和目的片段的连接产物转化,却一个菌都没长出来,重复了三次都这样。请问这是感受态细胞的制作不过关,还是连接出了问题?哪个可能性大些?

答:应该是连接的问题。所有连接反应建议同时转化酶切后的质粒作为另一个阴性对照,确定酶切是否完全。同时连接前请确定质粒和片段浓度达到最小连接量的要求。



感受态细胞放到-80冰箱了有半年了,还能用来转化质粒吗?

答:如-80冰箱储存过程中没有发生冻融的情况,是可以用来转化的,但是由于冻存时间过长,转化效率会有所下降,如果用于普通的质粒重转或TA克隆等高效连接体系也是可以的,如珍贵的样品请选用较为新鲜的感受态细胞。


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