CNTFR蛋白；睫状神经营养因子受体(CNTFR)重组蛋白

CNTFR蛋白；睫状神经营养因子受体(CNTFR)重组蛋白

英文名称：Recombinant Ciliary Neurotrophic Factor Receptor (CNTFR)

来源：原核表达

宿主：E.coli

规格：10μg   50μg   200μg   1mg   5mg

内毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法测定)具体详见说明书

片段与标签：Thr120~Leu358 with N-terminal His Tag

物种来源（人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猕猴、山羊、绵羊、马、牛、猪、鸡、狗等其他物种多物种）相同的名称，不同的物种。

CNTFR蛋白；睫状神经营养因子受体(CNTFR)重组蛋白性状：冻干粉

表达系统：    大肠杆菌

产品纯度：>95%-98%（SDS-PAGE & RP-HPLC）

保存条件：如果样品在2-4周内使用，可以在4°C低温储存。 

长期储存，建议添加载体蛋白（0.1％HSA或BSA），并储存在-20~ -80°C。避免多次冻融。

CNTFR蛋白；睫状神经营养因子受体(CNTFR)重组蛋白

蛋白重组表达策略组合

重组蛋白的表达往往不像理论那样一帆风顺，在实际的表达过程中有可能产生各种各样的问题。在选择一个的蛋白表达策略非常困难的情况下，那么采用看似笨拙的方法，有可能会成为一种意想不到的“成功捷径”，比如项目要求构建表达两种重组蛋白时，构建6种不同的表达质粒，意味着有36种不同的表达条件组合，通过高通量微量蛋白表达实验一次性就可获得蛋白表达条件组合，后续中式飞行试验和成本控制会变得相对容易。

蛋白原核重组表达服务具体流程

CNTFR蛋白；睫状神经营养因子受体(CNTFR)重组蛋白融合标签选择：

亲和标签：蛋白重组表达过程中采用亲和标签融合表达有两方面的作用：一方面是为了使蛋白纯化过程变得更加容易；另一方面是为了促进某些不溶性蛋白可溶。蛋白标签可分两类：一类是短肽类标签；一类是长肽以融合蛋白（fused partner）形式共表达。使用不同的蛋白标签需要根据具体案例来分析。

不同的系统步骤稍微有些不同的，大致步骤如下：

真核表达系统的重组蛋白表达步骤：

a.      选择表达载体和宿主细胞（常用的CHO和HEK293）

b.      表达载体的构建

c.      无内毒素的质粒抽提

d.      细胞瞬时转染

e.      表达小试，条件优化

f.       表达分析和鉴定（SDS-PGAE和WB）

g.      大量表达

h.      亲和纯化

i.        检测和鉴定

原核表达系统的重组蛋白表达步骤：

a.      选择表达载体

b.      密码子优化

c.      基因合成/亚克隆

d.      转化表达菌株

e.      蛋白表达小试分析

f.       如果蛋白可溶，蛋白亲和纯化

g.      如果蛋白不可溶，则需要变复性来制备可溶蛋白。

h.      鉴定，包括SDS-PAGE和WB鉴定

CNTFR蛋白；睫状神经营养因子受体(CNTFR)重组蛋白表达蛋白的分析、纯化、检测

　　诱导表达成功后，表达蛋白的分析、纯化、检测应该顺当，按一般的实验步骤做没太大的问题。

　　虽然，在大肠杆菌中表达的蛋白由于缺少高级修饰和糖基化、磷酸化等翻译后加工，常形成包涵体而影响表达蛋白的生物学活性及构象等缺点，但原核表达具有的操作简单、快捷，需时较短，表达产量高，适合工业化等优点，仍是我们合成外源蛋白的选择。原核表达的全过程有许多不确定因素，所以每完成一步都得检验结果是否正确，当实验遇到困难时如何进行分析，找到问题的症结是我们实验的关键。