真核翻译起始因子2α激酶3(EIF2aK3)重组蛋白

真核翻译起始因子2Α激酶3(EIF2AK3)重组蛋白

英文名称：Recombinant Eukaryotic Translation Initiation Factor 2 Alpha Kinase 3 (EIF2aK3)

WRS; PEK; PERK; HsPEK; PRKR-like endoplasmic reticulum kinase; Pancreatic eIF2-alpha kinase

来源：原核表达

宿主：E.coli

规格：10μg   50μg   200μg   1mg   5mg

内毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法测定)具体详见说明书

片段与标签：N-terminal His Tag

物种来源（人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猕猴、山羊、绵羊、马、牛、猪、鸡、狗等其他物种多物种）相同的名称，不同的物种。

性状：冻干粉

表达系统：    大肠杆菌

产品纯度：>95%-98%（SDS-PAGE & RP-HPLC）

保存条件：如果样品在2-4周内使用，可以在4°C低温储存。

真核翻译起始因子2Α激酶3(EIF2AK3)重组蛋白操作步骤

1．用缓冲液A漂洗菌体细胞（10ml/g）, 离心6000g×15min，收集菌体细胞，重复此步骤，将菌体细胞再在缓冲液A中洗涤一次。

2．将漂洗过的菌体细胞悬浮于缓冲液B中，超声破碎，镜检，破碎率高于95%，离心1500g×30min，收集包涵体沉淀。

3．将包涵体沉淀用缓冲液Ⅰ、缓冲液Ⅱ、缓冲液Ⅲ分别超声洗涤一次，1500g 离心收集包涵体沉淀。

4．包涵体的溶解：用含高浓度脲素的缓冲液室温放置30min，然后离心1500g×30min，留上清。将溶解后的蛋白质适当稀释，磁力搅拌，透析过夜。

5．溶解后的包涵体蛋白可通过亲和层析进一步纯化。

如果真核翻译起始因子2Α激酶3(EIF2AK3)重组蛋白没有表达很有可能的原因有两个:

1.载体构建错误。 另外有些酶产生粘端有些酶产生平端，这些都容易导致读码框错误，从而表达不出来。抗生素抗性/载体多次传代，特性发生变化；

2.宿主菌选择不当。不同的宿主菌其基因型是不一样的。有些经过特殊修饰的载体，或者特殊用途的载体，或者有特殊启动子的载体，必须选择合适的宿主菌进行表达。因此，当你的蛋白没有表达出来时，可以考虑更换宿主菌；

至于是否选择rosetta菌株，我认为倒不是最关键的：Rosetta的功能是补充6种稀有密码子对应的tRNA，提高外源基因，特别是真核基因在原核中的表达水平。Rosetta会提高表达水平，不会对蛋白的表达起有或无的影响。

另外，需要确定你所有试剂准确无误，我自己在早期实验的时候，有的试剂是实验室传下来的，有些是问别人借的，其中载体，宿主菌以及抗生素都出现过问题，你要确定你用的试剂来源和性质没有问题，这个非常关键。

多肽的融合表达纯化服务：擅长做多肽（小于10kDa）的融合表达纯化，通过蛋白酶去除融合标签蛋白，最终获得高纯度的小肽，氨基酸序列与天然多肽一致。

蛋白原核的可溶表达纯化：通过与融合标签融合表达，以及通过表达菌株及表达条件的优化，使得目的真核翻译起始因子2Α激酶3(EIF2AK3)重组蛋白以可溶的形式表达，进而放大纯化。

包涵体变复性：原核表达优化后仍然是包涵体，通过对包涵体的洗涤，去除大量的杂蛋白，用变性剂变性，对复性条件进行优化，获得复性蛋白。