莫佩亚病毒RT-PCR试剂盒

报价:¥1990
供货周期: 现货
品牌: LMAI Bio
型号: 50次
货号: LM18-81000
上海联迈生物工程有限公司
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产品详情

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莫佩亚病毒RT-PCR试剂盒原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0E1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。

特异性强

  PCR反应的特异性决定因素为:

  ①引物与模板DNA特异正确的结合;

  ②碱基配对原则;

  ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;

④靶基因的特异性与保守性。

莫佩亚病毒RT-PCR试剂盒产品及特点 :

聚合酶链式反应(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。本产品就是为满足这一需求根据 PCR 原理开发的产品,它具有下列特点:

1. 一管式操作,用户只需要提供样品即可。

2. 根据大豆热休克蛋白基因保守区域设计引物,能专一性检测出样品中的大豆成分,但不能检测其他非大豆成分。

3. 快速,整个检测过程(按一个样品计)所需时间仅为 2.0 小时。

4. 只需要普通 PCR 仪和凝胶电泳仪,无需配置贵重仪器设备。

5. 对混合样品中大豆成分的检测下限为 0.1%,对样品中大豆成分的核酸检测下限为 1.0ng/μL

6. 本只能用于科研,足够 50 40uL 体系的常规 PCR

莫佩亚病毒RT-PCR试剂盒包装规格及成分:

编号

成分

十孔盒包装(去纸托)

试剂一

2×PCR MagicMix

1mL(亮黄盖)

试剂二

源性成分 PCR 引物混合液

100 uL(白盖)

试剂三

源性成分 PCR 阳性对照

50 uL(黄盖)

试剂四

超纯水

1 mL(本色盖)

试剂五

DNA   释放剂试用装

50 次(成分见下)

试剂六

DNA 提取试剂溶液 A 成分一

50 uL(白盖)

试剂七

DNA 提取试剂溶液 A 成分二

100uL(绿盖)

试剂八

DNA 提取试剂溶液 B

400 uL(红盖)

试剂九

使用手册

1

运输及保存:低温运输,-20℃保存,有效期一年。使用本试剂盒提供的阳性对照时,由于其浓度较高,一定要注意不要污染其他试剂和成分。在专门的区域操作。

自备试剂:DNA 模板。

莫佩亚病毒RT-PCR试剂盒使用方法:

一、样品 DNA 的制备

1. 用自选方法纯化样品的 DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。

2. 如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作:

3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液(足够 10 个样品)为例:在一干净塑料管中加入 10uL 溶液 A 成分一,20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水,充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置,但在一周内用完,不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液,1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字,配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。

4. 在标记好的 N+2 个离心管中,加入 1-5mg 固体样品(半粒芝麻大小)或 5uL 液体样品待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照,在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。

5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液,确保固体样品被溶液淹埋,如果是液体样品则震荡混匀。

6. 95℃保温 10 分钟。

7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 PCR

二、莫佩亚病毒RT-PCR试剂盒 设置 PCR 反应(40 uL 体系) 

8. N+2 PCR 管中加入下列成分,下面以样品数为 1 举例(注意:如果一次使用DNA 释放剂,每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应,两个反应的模板使用量差 10 倍,由此确定用量,以后就用效果好的那个模板用量):

成份

样品(用量1

样品(用量2

阳性对照

阴性对照

即用型 PCR Mix 3.0

20 uL

20 uL

20 uL

20 uL

源性 PCR 引物混合液

2 uL

2 uL

2 uL

2 uL

制备的样品

18 uL

2 uL

样品制备阳性对照

不加

不加

2 uL

不加

样品制备阴性对照

不加

不加

不加

2 uL

超纯水

不加

16 uL

16 uL

16 uL

9. 轻柔混匀后上机,按下面参数进行 PCR

过程

温度

时间

预变性

94

10分钟

PCR 反应

35 个循环)

94

30s

60

30s

72

30s

延伸

72

7

10. 电泳检测 PCR 产物。预期的 PCR 产物长度为 216bp。阳性对照必须有此条带出

现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。对没有扩增产物的样品,需要用通用引物(如真核生物专一 PCR 引物,需自备)测试是否有抑制剂或样品是否浓度达到 PCR 的要求,如果通用引物也扩不出来,需要浓缩并再次纯化 DNA 样品,或者更换 DNA 提取方法,直到通用引物能够扩增出预计大小的片段。

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