| 供货周期： | 现货 |
| 品牌： | LMAI Bio |
| 型号： | 50次 |
| 货号： | LM18-74120 |
猪肺炎支原体PCR试剂盒原理是由一对引物介导，能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增，经过n个热循环扩增，扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0＜E＜1,扩增效率＝倍，使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
PCR反应的特异性决定因素为：
①引物与模板DNA特异正确的结合；
②碱基配对原则；
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
④靶基因的特异性与保守性。
猪肺炎支原体PCR试剂盒产品及特点 ：
聚合酶链式反应（PCR）是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。本产品就是为满足这一需求根据 PCR 原理开发的产品，它具有下列特点：
1. 一管式操作，用户只需要提供样品即可。
2. 根据大豆热休克蛋白基因保守区域设计引物，能专一性检测出样品中的大豆成分，但不能检测其他非大豆成分。
3. 快速，整个检测过程（按一个样品计）所需时间仅为 2.0 小时。
4. 只需要普通 PCR 仪和凝胶电泳仪，无需配置贵重仪器设备。
5. 对混合样品中大豆成分的检测下限为 0.1%，对样品中大豆成分的核酸检测下限为 1.0ng/μL。
6. 本只能用于科研，足够 50 次 40uL 体系的常规 PCR。
猪肺炎支原体PCR试剂盒包装规格及成分：
编号 | 成分 | 十孔盒包装（去纸托） |
试剂一 | 2×PCR MagicMix | 1mL（亮黄盖） |
试剂二 | 源性成分 PCR 引物混合液 | 100 uL（白盖） |
试剂三 | 源性成分 PCR 阳性对照 | 50 uL（黄盖） |
试剂四 | 超纯水 | 1 mL（本色盖） |
试剂五 | DNA 释放剂试用装 | 50 次（成分见下） |
试剂六 | 免 DNA 提取试剂溶液 A 成分一 | 50 uL（白盖） |
试剂七 | 免 DNA 提取试剂溶液 A 成分二 | 100uL（绿盖） |
试剂八 | 免 DNA 提取试剂溶液 B | 400 uL（红盖） |
试剂九 | 使用手册 | 1 份 |
运输及保存：低温运输，-20℃保存，有效期一年。使用本试剂盒提供的阳性对照时，由于其浓度较高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。在专门的区域操作。
自备试剂：DNA 模板。
猪肺炎支原体PCR试剂盒使用方法：
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
2. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的DNA 释放剂试用装。则按下面步骤操作：
3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液（足够 10 个样品）为例：在一干净塑料管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水，充分混合均匀即可。溶液 A 工作液可室温放置，但在一周内用完，不要长期放置。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液，1mL 工作液足够 10 个样品。如果待测样品数量为其他数字，配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。
4. 在标记好的 N+2 个离心管中，加入 1-5mg 固体样品（半粒芝麻大小）或 5uL 液体样品待测样品。在样品制备阳性对照中加入 5uL 阳性对照，在样品制备阴性对照中加入 5uL 水。
5. 在每个管中加入 100 uL 溶液 A 工作液，确保固体样品被溶液淹埋，如果是液体样品则震荡混匀。
6. 95℃保温 10 分钟。
7. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得 DNA 释放液。每个样品得到的 DNA释放液足够进行 50-100 次 PCR。
二、猪肺炎支原体PCR试剂盒 设置 PCR 反应（40 uL 体系）
8. 在 N+2 个 PCR 管中加入下列成分，下面以样品数为 1 举例（注意：如果一次使用DNA 释放剂，每个样品设置两个模板用量的 PCR 反应，两个反应的模板使用量差 10 倍，由此确定用量，以后就用效果好的那个模板用量）：
成份 | 样品（用量1） | 样品（用量2） | 阳性对照 | 阴性对照 |
即用型 PCR Mix 3.0 | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL |
源性 PCR 引物混合液 | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
制备的样品 | 18 uL | 2 uL | 无 | 无 |
样品制备阳性对照 | 不加 | 不加 | 2 uL | 不加 |
样品制备阴性对照 | 不加 | 不加 | 不加 | 2 uL |
超纯水 | 不加 | 16 uL | 16 uL | 16 uL |
9. 轻柔混匀后上机，按下面参数进行 PCR。
过程 | 温度 | 时间 |
预变性 | 94℃ | 10分钟 |
PCR 反应 （35 个循环） | 94℃ | 30s |
60℃ | 30s | |
72℃ | 30s | |
延伸 | 72℃ | 7分 |
10. 电泳检测 PCR 产物。预期的 PCR 产物长度为 216bp。阳性对照必须有此条带出
现，阴性对照必须无任何扩增，否则实验无效。对没有扩增产物的样品，需要用通用引物（如真核生物专一 PCR 引物，需自备）测试是否有抑制剂或样品是否浓度达到 PCR 的要求，如果通用引物也扩不出来，需要浓缩并再次纯化 DNA 样品，或者更换 DNA 提取方法，直到通用引物能够扩增出预计大小的片段。
关联PCR试剂盒：
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