气单胞菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒|50次|LM18-25300-上海联迈生物工程有限公司

产品详情

中文名称：气单胞菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒

英文名称：Aeromonas spp.

运输：低温运输

保存：-20℃保存

有效期：一年

货期：现货

产品介绍：聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR），是体外酶促合成特异DNA片段的一种经典方法，由变性、退火及适温延伸组成，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点，是分子生物学实验的最基本实验技术。

如何选择气单胞菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒：RT-PCR是指将RNA 的反转录（RT）和cDNA 的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。利用逆转录酶将RNA逆转录（RT）成cDNA（Complementary DNA），再以cDNA 为模板，扩增合成目的片段。RT-PCR的常见应用包括基因检测、转录物变异检测，以及克隆和测序用cDNA模板制备。

PCR反应鉴定——PCR反应条件

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	5 min	1
变性	94℃	10 sec	30-40
退火	50-65℃	20 sec
延伸	72℃	30 sec/kb
终延伸	72℃	5 min	1

注：

a）退火温度：请参考引物的理论 Tm 值，退火温度可设置低于引物理论值 2-5℃。

b）延伸时间：需要根据片段的长度来确定，对于1 kb以内的DNA片段，建议延长时间为30 sec。

气单胞菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒常见问题与解决方法:

常见问题	可能原因	解决方法
阳性对照、待测样本均无条带。	PCR反应体系或反应条件不合适。	使用梯度PCR摸索PCR反应条件。
	PCR试剂保存不当失去活性。	2× PCR Mix应保存于-20℃，使用时避免反复冻融。若使用频繁，可在4℃短时间存放。
	引物设计问题。	尝试重新设计引物进行检查。
阳性对照有目的条带，待测样本无条带或条带弱。	不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。	使用新鲜的试剂。
	加入组织裂解液过量。	增大反应体系，或减少裂解液的用量。
	样本裂解混合液保存不当或保存时间过久，DNA基因组已经降解。	裂解混合液液可在4℃保存2-3天，尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。
	模板加入量不适合。	在反应体系10-20%范围内优化模板加入量。反应效性能较差时，可以降模板浓度调节到低于10%的范围。
	PCR循环数不足。	适当增加PCR的循环数，推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂，一般PCR反应要比用纯化的 DNA模板多5-10个循环为佳。
非特异性扩增	PCR退火温度太低，循环数、引物浓度或模板浓度太高。	增加PCR退火温度，降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。
	PCR引物错配。	重新设计PCR引物。
	配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。	PCR反应体系的配制在低温下进行，配制完成后尽快进行PCR扩增反应。
阴性对照出现目的条带	操作工具或试剂污染。	实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。
阴性对照出现目的条带	样本间交叉污染。	每个取样器只对一个样本使用；或取完一个样本后，将取样器刃口浸入2%的次氯酸钠溶液中，反复涮洗，然后用干净的纸巾擦干残液。

注意事项

1. 建议使用新鲜采取的动物组织，若为长期冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响PCR效率。

2. 试剂Buffer AL若低温保存，易产生沉淀。在使用前务必将其在室温中放置一段时间，也可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀，混匀后再使用。

3. 电泳检测时，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否则，电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带，影响实验结果。

4. 建议扩增片段长度1 kb以内，以便扩增效率佳。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

气单胞菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒运输与保存方式

冰袋运输。-20℃避光储存，有效期一年。本品避免反复冻融。建议分装保存。

供货周期：	现货
品牌：	LMAI Bio
型号：	50次
货号：	LM18-25300