链球菌A组探针法荧光定量PCR试剂盒 化脓

链球菌A组探针法荧光定量PCR试剂盒 化脓PCR在分子克隆和DNA分析中有多种用途，下面就向大家介绍PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：链球菌A组探针法荧光定量PCR试剂盒 化脓结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR实验步骤

典型的PCR由（1）高温变性模板；（2）引物与模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是：

将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；

　　人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；

　　耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。

实验过程：

一、链球菌A组探针法荧光定量PCR试剂盒 化脓试剂准备

1. DNA模板

2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步骤 

1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。

      10×PCR buffer             5μl

      dNTP mixl                 4μl

       引物1（10pM）               2μl

       引物2（10PM）              2μl

       Taq酶（2U/μl）            1μl

      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

      加ddH2O至               50 μl

    视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。

3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

三、链球菌A组探针法荧光定量PCR试剂盒 化脓注意事项

１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。

２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。

３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。

４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。

５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。

６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。

７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。

相关PCR产品列表：

17-37050 Hepatitis B Virus(HBV)乙型肝炎病毒E型染料法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-37060 Hepatitis B Virus(HBV)乙型肝炎病毒F型染料法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-37070 Hepatitis B Virus(HBV)乙型肝炎病毒G型染料法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-37000 Hepatitis B Virus(HBV)乙型肝炎病毒H型染料法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-37080 Hepatitis B Virus(HBV)乙型肝炎病毒通用型染料法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-53010 Hepatitis C Virus(HCV)丙型肝炎病毒1型染料法荧光定量RT-LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-53020 Hepatitis C Virus(HCV)丙型肝炎病毒2型染料法荧光定量RT-LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-53030 Hepatitis C Virus(HCV)丙型肝炎病毒3型染料法荧光定量RT-LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-53040 Hepatitis C Virus(HCV)丙型肝炎病毒4型染料法荧光定量RT-LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-53050 Hepatitis C Virus(HCV)丙型肝炎病毒5型染料法荧光定量RT-LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-53060 Hepatitis C Virus(HCV)丙型肝炎病毒6型染料法荧光定量RT-LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-53000 Hepatitis C Virus(HCV)丙型肝炎病毒染料法荧光定量RT-LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-10200 Hepatitis D Virus(HDV)丁型肝炎病毒染料法荧光定量RT-LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-35200 Hepatitis E Virus(HEV)戊型肝炎病毒染料法荧光定量RT-LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-12500 Hepatitis G Virus(HGV)庚型肝炎病毒染料法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-68700 Hepatopancreatic Parvovirus(HPV)肝胰腺细小病毒染料法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-64110 Herpes Simplex Virus(HSV)单纯疱疹病毒1型染料法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-64120 Herpes Simplex Virus(HSV)单纯疱疹病毒2型染料法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-64100 Herpes Simplex Virus(HSV)单纯疱疹病毒通用染料法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-91700 Herpesvirus Saimiri(HVS)松鼠猴疱疹病毒染料法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-39000 Herpesvirus Simiae(HVS)猿疱疹病毒染料法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-29030 Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus(PRRSV)高致病性猪生殖与呼吸综合症病毒染料法荧光定量RT-LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-78410 Histoplasm farcinimosum马皮疽组织胞浆菌染料法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-78400 Histoplasm spp.组织胞浆菌通用染料法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-78420 Histoplasma capsulatum荚膜组织胞浆菌染料法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-78430 Histoplasma farciminosum假皮疽组织胞浆菌染料法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-22700 HIV-1 Provirus HIV-1前病毒染料法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-59200 HIV-2 Provirus HIV-2前病毒染料法荧光定量LAMP恒温扩增试剂盒 50次

17-42300 Hog Cholera Virus猪霍乱病毒(即CSFV)染料法荧光定量RT-LAMP恒温扩增试剂盒 50次