产品详情
Rapid Sticky-end Ligase ProMix
产品概述
Rapid Sticky-end Ligase ProMix是一种即用型的2× 预混液,包含高浓度的T4 DNA连接酶和为粘性末端快速连接优化的缓冲液,大大提高了粘性末端的连接效率和转化效率,确保克隆实验的成功率;25℃孵育5 min即可进行转化,大幅度减少了克隆实验所需要的时间;此外,连接产物可转化多种大肠杆菌感受态细胞。
产品内容 组分 | LM031A | LM031B |
Rapid Sticky-end Ligase ProMix | 250 μL | 500 μL |
产品优势
快速:5 min即可完成连接反应。
高连接效率:低浓度的DNA底物也可以完成连接反应并转化成功。
方便快捷:2×预混液包装,减少加样次数,使得克隆更为高效。
实验案例 1. 粘性末端 5 min快速连接
以EcoRΙ、SalΙ进行双酶切后回收得到的pET-28a载体及基因片段(500 bp)作为粘性末端连接底物,用Rapid Sticky-end Ligase ProMix进行25℃,5 min快速连接后,转化到DH5α感受态细胞,培养12-16 h后,平板菌落生长状况如图1所示,随机挑取15颗单克隆用载体通用引物进行菌落PCR,后进行琼脂糖凝胶检测,如图2所示,分析上述结果可得,Rapid Sticky-end Ligase ProMix对粘性末端的连接具有优异连接效率及阳性率。
2.高连接效率
以HindⅢ、EcoRΙ进行双酶切后回收得到的pUC19载体及基因片段(0.5 kb)作为粘性末端连接底物,用从A、B公司购入的同类产品、T4 Quick Ligation Mix、Rapid Sticky-end Ligase ProMix进行25℃,5 min快速连接,后转化到DH5α感受态细胞,在含有X-Gal、IPTG、Amp的L-琼脂平板上培养,形成单菌落,并进行菌落计数并计算转化效率。从结果中可看出T4 Quick Ligation Mix、Rapid Sticky-end Ligase ProMix具有较高的转化效率及连接效率。
应用范围
粘性末端连接、dsDNA切刻修复、高丰度文库制备。
产品存储
-20℃保存