大肠杆菌TB1感受态细胞

大肠杆菌TB1感受态细胞

产品及特点本感受态细胞来源于 JM 83，是 JM 83 hsdR 型，只含有大肠杆菌 RNA polymerase， 缺少 BL21 (DE3)菌株的 T7 RNA polymerase，适合 NEB 公司的 pMAL 系列质粒原核 蛋白表达(The pMAL vectors use the E. coli RNA polymerase)，不能用于 pET 系列质 粒的表达，具有链霉素抗性。TB1 感受态细胞由特殊工艺制作，经 pUC19 质粒检测转化 效率高达 108cfu/μg。

菌株基因型为：F– ara Δ(lac-proAB) rpsL (Strr )[φ80 dlacΔ(lacZ)M15] thi hsdR
规格及成分 成分 编号 包装
本产品 140645 0.1 mL×10
使用手册 1 份

运输及保存 干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂 目的 DNA、SOC 或 LB 培养基等

使用方法

1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μL，可以根据实际情况分装使用。以下实验以 100 μL 感受态细胞为例。

2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的 DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常 100 μL 感受态细胞能够被 1 ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴 25 分钟。

3. 42℃热击 45 秒，迅速将离心管转移到冰浴中并静置 2-3 分钟，晃动会降低转化效率。

4. 每个离心管中加入 700 μL 无菌的 2YT 或 LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于 37℃摇床，200 rpm 振荡培养 60 分钟使菌体复苏。

5. 5000rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μL 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 培养基上。

6. 将平板倒置于 37℃培养箱中培养 12-16 小时。

注意：

1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的 DNA 总量较少，可取 200-300 μL 转化产物涂布平板。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 诱导时，IPTG 浓度可选（0.1-2mM 均可）。

4. 为获得需要量的蛋白，佳诱导时间，温度，IPTG 浓度需实验者优化。