DOP-PCR试剂盒

DOP-PCR试剂盒

产品及特点 DOP-PCR（Degenerate Oligonucleotide Primer PCR，简并寡聚核苷酸引物PCR）是扩增全基因组的方法之一，它利用中间含有 6 个随机碱基的 22nt 引物，通过两轮 PCR（一轮低温复性，第二轮高温复性）而将模板 DNA 扩增。DOP-PCR扩完整基因组的效率不如利用 phi 29 DNA 聚合酶的 MDA，但在扩增高度降解的痕量 DNA 方面具有巨大优势，在法医鉴定领域具有重要应用。本产品就是在 DOP-PCR基础上进行优化而开发，它具有下列特点：
1. 专门用于高度降解的 DNA，方便，含有除模板 DNA 和引物以外的所有成份，简化了准备工作。
2. 优化的引物浓度，使自连序列和非模板相关序列的合成。
3. 使用高保真酶，降低突变率。
4. 长度在 300-1700bp 之间，平均 500bp 左右。
5. 模板基因 DNA 用量一般为 10-100pg。
6. 所得 PCR 产物可用于 STR 多重扩增、比较基因组杂交、单染色体文库构建、基因组图谱研究等。
运输及保存 低温运输、-20℃保存, 保存期限为 12 个月。不要反复冻融。
自备试剂 DNA 模板、引物、超纯水。

使用方法 1. 在一干净的 PCR 管中，加入下列成分：成分 阴性对照 样品
DOP-PCR MagicMix 25 uL 25 uL
基因组 DNA 模板(自备) 10-100 pg（或 不加或单个细胞 一个单个细胞）
DOP-PCR 引物 (20 pmol/uL) 5 uL 5 uL
补水到 50 uL 50 uL
2. 放入 PCR 仪中按下列参数进行 DOP-PCR。
预变性 95℃ 5 min 94℃ 1 min
一轮 PCR 30℃ 1.5 min
(12 个循环) 72℃（30℃升到 72℃的时间3 min 设定为 3 分钟）
94℃ 1 min第二轮 PCR 62℃ 1 min
(35 个循环) 72℃（每次循环后此步的保温
2 min 时间延长 14 秒）
延伸 72℃ 7 min
4℃ Forever
3. 结束后取 5-10 uL 直接上样电泳（不需要额外再加 DNA 上样液）, 红色染料电泳速度相当于 50 bp DNA 片段。DOP-PCR 产物的长度一般在 300-1700 bp之间。
4. 所得 DOP-PCR 产物可以用于后续 PCR 检测或其他分析。