荧光PCR之探针法

2020-07-28 12:45  下载量:1

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荧光PCR的探针法分为全基因组核酸探针、克隆探针、寡核苷酸探针、单链RNA探针、cDNA探针、蛋白质探针以及酶探针。带大家一起了解下寡核苷酸探针、cDNA探针、RNA探针的特点。寡核苷酸探针特异性较高,区别染色体上一个碱基的突变;由于其链短,分子量小,杂交时间较短(仅需1-2小时),可预测杂交条件,可直接利用DNA序列人工合成获得特异片段而无需分子克隆,获得探针相对容易。但是由于其链短致使标记率较低,也影响了检测的敏感性,仅能检出含很少的标本。cDNA探针以RNA为模板,用反转录酶合成单链cDNA探针。主要用来分离cDNA文库中相应的基因。RNA探针一般是单链,具有单链DNA探针的优点,又具有RNA:DNA杂交体比DNA:DNA杂交体有更高的稳定性,所以在杂交反应中RNA探针比相同活性的DNA探针所产生信号要强。荧光定量PCR类产品的组成方式通常为:1管反应缓冲液+1管酶的形式。其中反应缓冲液包含荧光PCR反应缓冲系统、引物、探针、dNTP;酶包含Taq酶、UNG酶。这种形式的产品使用方法复杂,必须先将反应缓冲液和酶按照比例混合均匀后,分装至PCR扩增管中,然后再加入样本。由于酶的用量通常较少(≤0.5μL)、酶液较粘稠,且配制过程繁琐,配制误差较大、反应重复性不好。荧光PCR冻干的试剂冻干机Pilot5-8T技术要点: 1.完整的PAT控制技术,可对冻干过程进行完整的控制和分析监控。包括预冻全过程控制、预冻结束判定、升华全过程控制、升华结束判定、解析全过程控制及冻干结束判定。 2.板层温度均一度±1℃。 3.系统极限真空度±1Pa。 4.系统真空泄露率<3Pa.L/S。 5.外界干扰热量屏蔽。 6.共晶点测试仪助力工艺开发。 7.全进口配件

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