很多小伙伴觉得做Western Blot是很麻烦的一件事，即使准备了好久，也可能会由于各种问题导致不理想的结果，时间精力全白费了。
为此，今天莫纳丽莎带来了这份Western Blot实验的一些常见问题及解决方案，可以帮助您更直观地识别蛋白印迹上的特定或常见问题，例如背景高、信号弱或无信号，转印不均匀等...为您揭示可能的原因并给出相应的解决方案 ，让大家获得更理想的 Western Blot实验！
01 样品制备和上样的问题
结论：经过合适样品制备方法和恰当的蛋白上样量，在电泳后得到的凝胶，经过考马斯亮蓝、银染等总蛋白染色的方法所得到的条带是较为整齐、不拖尾、不弥散、不变形的。
常见的问题与结果分析
问题1：裂解液或样品缓冲液中的还原剂过多导致泳道边缘有阴影。
问题2：盐离子过高、RIPA浓度过高、变性剂浓度过高会导致泳道宽度不一致，泳道变宽。
问题3：样品过粘，样品泳道边缘有纵向条纹，哑铃型条带，泳道变宽。
问题4：蛋白质聚集导致形状诡异的狭窄泳道。
问题5：泳道的蛋白上样量过高。
解决方案
02 电泳问题
常见的问题与结果分析
电泳出现的问题包括制胶和跑胶，常见的情况具体如下：
问题1：由于配制胶的组分不合理或者温度、阳光、杂质等外界因素的影响导致丙烯酰胺聚合不完全。
问题2：电泳时温度影响蛋白条带的形状。
问题3：凝胶百分比选择不恰当，导致浓缩胶效果不好、目标条带跑出胶外、或目标条带分离不彻底。
问题4：电泳装置不完善，内槽漏液导致条带倾斜。
解决方案
03：转印问题
常见的问题与结果分析
问题1：膜上残留气泡导致的条带问题。
问题2：转印过度（转印膜上条带量非常少，条带出现在滤纸上）。
问题3：转印不足（转印前后的凝胶的总蛋白对比，差异不大）
问题4：转印不均匀。
解决方案
04
背景问题
印迹膜曝光时常见的背景问题如下：
问题1：背景过强。
问题2：背景有污迹。
问题3：背景有斑点。
解决方案
05
非特异条带问题
问题1：膜曝光时出现目的条带以外的信号。
解决方案
06
弱检测信号问题
问题1：膜曝光时难以看到条带信号。
解决方案
看完了以上的分析，大家在Western Blot实验中遇到的问题是不是都对号入座了呢？欢迎大家在评论区留言分享自己的问题和经验。
科研路上有莫纳，实验多难都不怕。这么好的干货，大家赶紧收藏、转发，造福更多小伙伴吧！
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