色谱柱冲洗和保存
停机前,将色谱柱彻底冲洗,使用说明书中指明的溶剂保存色谱柱。 从仪器上卸下色谱柱,用堵头密封保存。 仪器冲洗和溶剂置换 液相色谱相关单元需全部进行溶液置换和冲洗,防止管路污染或堵塞。 反相色谱置换步骤: 1)取下色谱柱后用两通连接管路。 2)如果流动相中含有缓冲盐,将相应管路更换为纯水,排气(Purge)5分钟,再以1.0mL/min流速冲洗色谱系统30分钟 3)将仪器所有管路都置换成纯甲醇溶液(包括流动相管路比如四元低压梯度系统A/B/C/D四管路或者二元高压梯度系统A/B两管路、进样器洗针液管路、泵柱塞杆清洗液管路)。 4)将流动相排气(Purge)5分钟,自动进样器排气25分钟,以1.0 mL/min流速冲洗色谱系统30分钟。 注意:如果流动相中不含缓冲盐,可跳过步骤2) 正相色谱置换步骤: 1)取下色谱柱用两通连接管路。 2)将仪器所有管路都置换成纯异丙醇(包括流动相管路比如四元低压梯度系统A/B/C/D四管路或者二元高压梯度系统A/B两管路、进样器洗针液管路、泵柱塞杆清洗液管路)。 3)将流动相排气(Purge) 5分钟,自动进样器排气25分钟,以1.0mL/min流速冲洗色谱系统30分钟。 关机 清理进样器中的样品瓶,妥善处理。 清空废液瓶中的废液。 关闭所有单元的电源。 接通硬件电源 依次打开液相色谱各单元和电脑的电源开关,观察液相各单元的绿色指示灯依次亮起。 仪器溶剂置换 反相色谱置换步骤: 1)将输送水相的流动相管路置换成超纯水,自动进样器洗针液管路置换成50%甲醇水溶液,柱塞杆清洗管路置换成10%异丙醇水溶液。流动相管路排气(purge) 5分钟,自动进样器管路排气(purge) 25分钟。 2)用1.0 mL/min流速、50%甲醇水溶液为流动相,冲洗色谱系统30分钟。 正相色谱置换步骤: 1)将流动相管路按照实验条件置换成相应溶剂,自动进样器洗针液管路使用与流动相相同的溶剂作为清洗液。流动相管路排气5分钟,自动进样器管路排气25分钟。 2)用1.0 mL/min流速冲洗色谱系统30分钟。 方法平衡 按照需要进行的实验条件配制流动相,将配制好的流动相放在仪器上,执行流动相管路排气操作后,确认色谱柱在柱温箱内正确安装,调用方法文件,启动液相色谱输送流动相对色谱柱进行平衡约半小时到一个小时。
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