牦牛皮肤细胞；BMU-S1厂家

细胞名称 牦牛皮肤细胞；BMU-S1

形态特性  成纤维细胞样

生长特性 贴壁生长

特征特性  该细胞系来源于一雄性黑牦牛的皮肤组织。1996年由中国科学院昆明细胞库建立。

培养条件  DMEM-H: Dulbecco＇s Modified Eagle＇s Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  15NBS

传代方法  1：2传代；3-4天一次

传代情况 P4

冻存条件  基础培养基+5DMSO+20FBS　　

细胞培养操作规程：

主要功能：

（1）血管平滑肌细胞的再生能力是原发血管病变的重要因素。

（2）表达钙通道及ICAM-1和VCAM-1，参与血管壁的炎症反应。

（3）与血管疾病的进展和稳定有关。

生理变化：

（1）主动脉硬化。

（2）主动脉瘤

（3）主动脉钙化。

一般培养方法:

1、组织块培养法

A）按照前述方法取材，将组织剪成或切成1mm3大小的小块，并加入少许培养基使组织湿润。

B）牦牛皮肤细胞；BMU-S1厂家将小块均匀涂布于瓶壁，每小块间距0.2 cm～12.5px，一般在25mL培养瓶（底面积为437.5px2）可接种20～30小块为宜，小块放置后，轻轻翻转培养瓶，使瓶底朝上，然后于瓶内加入适量培养基盖好瓶塞，将瓶倾斜放置在37℃温箱内。

C）培养2～4小时，待小块贴附后，将培养瓶缓慢翻转平放，静置培养，动作要轻，严禁摇动和来回振荡，以防由于冲动而使小块漂起而造成培养失败，若组织块 不易贴壁可预先在瓶壁涂一薄层血清、胎汁或鼠尾胶原等。开始培养时培养基不宜多，以保持组织块湿润即可，培养24小时后再补液，培养初期移动和观察时要轻 拿轻放，开始几天尽量不去搬动，以利贴壁和生长，培养3～5天时可换液，一方面补充营养，一方面去除代谢产物和漂浮小块所产生的毒性作用。

2、消化培养法

该方法是采用前述的消化分散法，将妨碍细胞生长的细胞间质（包括基质、纤维等）去除，使细胞分散形成细胞悬液，然后分瓶培养。

3、悬浮细胞培养法

对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

培养操作：

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消化。  

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取

CARKD 英文名称： 碳水化合物激酶结构域蛋白质抗体 0.2ml

Anti-KCNA5 钾电压阀门通道混合器相关亚家族成员5抗体Multi-class antibodies规格： 0.2ml

SAA3(Human serum amyloid A3) ELISA Kit 人血清淀粉样蛋白A3Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-MK2/MAPKK2 原活化蛋白激酶激酶2抗体Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh KCNC3/Kv3.3 离子通道蛋白Kv3.3抗体 规格 0.2ml

CORT ELISA Kit 大鼠皮质酮/肾上腺酮 96T

PHEX 英文名称： 维生素D低磷性佝偻病蛋白 0.2ml
牦牛皮肤细胞；BMU-S1厂家ARVCF 英文名称： 精神分裂症与犰狳重复基因抗体 0.2ml

Anti-WNK1 赖氨酸缺陷型蛋白激酶1抗体Multi-class antibodies规格： 0.2ml

TBA ELISA Kit 大鼠总胆汁酸Multi-class antibodies规格： 48T

Anti-TBX3 转录因子Tbx3抗体Multi-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Goat Anti-Bovine IgG/PE-Cy7 PE-Cy7标记的羊抗IgG 规格 0.1ml

MSH(Human melanocyte stimulating hormone) ELISA Kit 人黑色素细胞刺激素 96T

N-cadherin 英文名称： N-钙粘附分子抗体 0.1ml
牦牛皮肤细胞；BMU-S1厂家运输保存：采用干冰保存运输。收到细胞时，若干冰已经完全融化，请立即将细胞复苏培养；若尚留有干冰，请立即将细胞放入液氮中保存待用，请按指定条件贮存细胞，切不可将细胞置于高温环境。