非洲猪瘟PCR试剂盒

　　通用型DNA快速提取试剂盒说明书

　　【产品名称】

　　通用名称：通用型DNA快速提取试剂盒

　　商品名称：无

　　汉语拼音：DNA Kuaisutiqushijihe

　　【产品简介】

　　本试剂盒基于硅胶吸附柱核酸纯化技术，适用样本为全血、血清和拭子(包括鼻拭子、口腔拭子、环境取样拭子等)，仅需裂解-过柱-洗涤-洗脱四个步骤即可获得高浓度、高纯度的DNA，无蛋白质污染。本试剂盒提取效率高，质量稳定可靠，操作方便、快捷。

　　用户需自备的试剂为无水乙醇或95%以上的医用酒精。

　　【产品内容】

　　【使用前注意事项】

　　1. 溶液3在使用前需加入15mL无水乙醇并充分混匀。

　　2. 溶液4在使用前需加入20mL无水乙醇并充分混匀。

　　3. 需自备若干离心管，本试剂盒提供的50支1.5mL离心管仅用于收集最终提取的DNA溶液。

　　4. 以下操作如非指明，均在室温下进行。

　　5. 本试剂盒赠送1支15mL的量取乙醇 管，所有使用无水乙醇的步骤均可用95%以上的医用酒精替代。

　　6. 离心机于8000 rpm运行时，离心力应大于1400g;使用掌上离心机时，需将离心时间延长至1min。

　　【操作步骤】

　　1. 全血、血清样本：在1.5mL离心管中加入200μL样本。

　　拭子样本： 将1个拭子置于离心管中，加入400μL无菌生理盐水，充分涡旋后，取200μL溶液置于1.5mL离心管中。

　　2. 加入20μL蛋白酶K，涡旋或颠倒混合均匀，56℃孵育10min。(无加热设备的情况下可于室温静置孵育15min)

　　3. 加入400μL溶液2，涡旋或颠倒混合均匀，56℃孵育5min。(无加热设备的情况下可于室温静置孵育5min)

　　注意：当样本为全血时，静置5min后请于12000rpm离心2min，吸取上清至另一离心管。不产生沉淀的血清和拭子样本可省略离心步骤。

　　4. 加入200μL无水乙醇，涡旋或颠倒混合均匀。

　　5. 将DNA吸附柱置于收集管中，将上述溶液全部转移到DNA吸附柱中，8,000 rpm离心30s，弃滤液。

　　6. 向DNA吸附柱重新放回收集管中，加入400μL溶液3，8,000 rpm离心30s，弃滤液。

　　注意：初次使用前需向溶液3瓶中加入15mL的无水乙醇，并充分振荡混匀。

　　7. 将DNA吸附柱重新放回收集管中，加入400μL溶液4，8,000 rpm离心30s，弃滤液。

　　注意：初次使用前需向溶液4瓶中加入20mL的无水乙醇，并充分振荡混匀。

　　8. 将DNA吸附柱重新放回收集管中，8,000 rpm空转离心30s，弃滤液。将吸附柱打开置于室温5分钟，以彻底晾干。

　　注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。

　　9. 将DNA吸附柱置于新的1.5mL离心管中， 向吸附柱柱膜中央上方小心加入50μL 溶液5(此步骤请谨慎操作，枪头请勿接触柱膜)，8,000 rpm离心30s，洗脱液即为DNA溶液。

　　注意：洗脱体积不应少于30μL，体积过小影响回收效率。DNA溶液请置于-20℃冰箱中保存，避免反复冻融。

　　【规格】 50次/盒

　　【贮藏及有效期】室温(15-25℃)保存，有效期12个月。

　　【批准文号】

　　【生产企业】 广州悦洋生物技术有限公司

　　仅供兽医诊断使用

　　非洲猪瘟病毒荧光PCR快速检测试剂盒说明书

　　兽用

　　【兽药名称】

　　通用名称：非洲猪瘟病毒荧光PCR快速检测试剂盒

　　商品名称：无

　　汉语拼音：Feizhouzhuwenbingdu Yingguang PCR Kuaisu Jiance Shijihe

　　英文名称：Real-time PCR for Rapid Detection of African Swine Fever Virus

　　【主要成分与含量】

　　【作用与用途】本试剂盒适用于猪血液、猪肉组织、淋巴结、脾脏等样本中非洲猪瘟病毒核酸的检测。

　　【用法与判定】

　　1 用法

　　1.1 样品处理及模板准备

　　请利用商品化试剂盒提取核酸。

　　1.2 荧光PCR扩增

　　1.2.1 试剂准备

　　实验前20分钟将试剂从冰箱取出并恢复至室温，使其完全融化，充分混匀后瞬时离心去除管壁吸附液体。

　　1.2.2 配制反应体系

　　按下表1体系，在配套PCR管中配制反应体系，盖紧管盖后瞬时离心10秒，转移至扩增区。

　　表1 PCR反应体系

　　1.2.3 PCR扩增

　　开机预热并检验仪器性能后，取配制好体系的PCR反应管，放置在样品槽相应位置，记录顺序，按下表2设置扩增参数，进行PCR扩增。

　　表2 仪器PCR扩增参数

　　2 判定

　　2.1 合理调整阈值线，不同仪器可根据仪器噪音情况进行调整。

　　2.2 试剂盒有效性判定

　　·阴性对照：无Ct值，线形为直线或微斜，无明显指数增长。

　　·阳性对照：Ct值≤30，有明显指数增长，呈典型的S型曲线。

　　2.3 样本结果判定

　　·样本检测结果Ct值≤40，有明显指数增长，判定为阳性，表明样本中检测出非洲猪瘟病毒。

　　·样本检测结果40<ct≤45，判定为可疑。应对样本进行复测，若复测结果ct值仍在40~45之间，有明显指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。< p="">

　　·样本检测结果无Ct值，判定为阴性，表明样本中未检测出非洲猪瘟病毒。

　　【注意事项】

　　(1)实验前请仔细阅读本试剂盒说明书，严格按步骤执行，不使用本试剂盒提供的组份或不按照说明书进行实验可能导致错误结果。

　　(2)所有试剂应在规定温度储存。-20℃保存的试剂在使用前应充分混匀。试剂盒反复冻融次数不宜超过5次。

　　(3)实验操作应按照国家有关临床基因扩增实验室管理规范执行，实验过程应分区(试剂准备区、样本制备区、核酸扩增区)，各区物品为 ，不得交叉使用，避免污染。

　　(4)操作台、移液器、离心机等仪器用品应经常用1%次氯酸钠、75%乙醇或紫外灯进行消毒。耗材应进行无酶处理。

　　(5)待检样本、试剂盒组份及实验中的废弃物需按照具有潜在传染性物质处理方法进行处理。

　　(6)为防止荧光干扰，应避免使用含荧光物质的手套，避免用手直接接触，预防交叉污染。

　　(7)检测结果为阴性，并不完全代表为非感染状态，具体诊断需结合兽医临床。

　　(8)产生假阴性的可能原因为：待检样本在采集、运输、保存及核酸提取过程中操作不当造成DNA降解;样本中核酸浓度低于最低检测限;病毒待测靶基因出现变异;未经验证的其他干扰因素。

　　(9)产生假阳性的可能原因为：待检样本采集、运输及核酸提取过程中发生交叉污染。

　　【规格】 50反应/盒

　　【贮藏及有效期】 试剂盒-20℃以下冷冻避光保存，有效期为12个月。

　　【批准文号】

　　【生产企业】 广州悦洋生物技术有限公司

　　仅供兽医诊断使用