多重标记免疫组化小知识

 

常规的多重标记免疫组化,其原理、荧光素配伍及流程优化如下:

基本原理:
多重标记是利用免疫学和细胞化学原理,在同一张切片上同时采用或先后采用不同颜色的荧光色素或酶促产物,或采用不同直径大小颗粒胶体金来原位示踪组织或细胞内不同抗原大分子物质的一项标记染色技术。
采用呈现不同颜色的荧光色素配伍,分别标记不同的抗体,再通过各自与同一切片上的相应抗原特异性结合而加以区别显示所建立起来的双重免疫组化染色技术。

荧光素配伍:
FITC(异硫氰酸荧光素)——翠绿色,常与呈红色的罗丹明或TRITC(异硫氰酸四甲基罗丹明)配伍。

流程优化:
  • 抗体稀释,染色前先摸索单通道下每个单抗的量佳浓度范围。

  • 抗体与荧光素匹配,平衡待检样品中靶点峰度和各通道信号强度。

  • 染色顺序优化,保证多次加热切片不会影响后面靶点表位的完整性。

  • 构建光谱库


爱必信多重荧光免疫组化染色试剂盒,采用TSA技术,基于酪酰胺的信号放大技术能够检测用传统方法无法检出的低丰度靶标,且无需担心抗体交叉反应,以及一抗二抗种属匹配问题,大大减少了实验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。

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