药物对肿瘤细胞增殖的影响是评价抗肿瘤药物药效的基础工作，随着相关仪器和实验条件的普及，cck-8（Cell Counting Kit-8）法和 MTT（3-（4,5-二甲基-2-噻唑基）-2,5-二苯基-2H-溴化四唑，MTT）法成为最为常用的方法 cck-8法和MTT法都是适合大规模、快速评价药物的方法，但由于药物作用后引起的细胞死亡方式不同，如细胞衰老、细胞自噬，导致敏感性下降，主要原因是这两种方法均是根据活细胞内的线粒体活性进行间接检测。衰老的细胞是活细胞，细胞自噬时也是活细胞，线粒体保持完整而出现 MTT染色阳性），因此cck-8和MTT均受上述细胞的干扰。我们通过把培养时间延长到 96h，可最大限度地减少不增殖但成活的细胞影响，使cck-8法检测结果表现出克隆形成率相似的敏感度。 与MTT相比较，cck-8法优势明显。在一定细胞数范围内，cck-8检测 OD值与活细胞数的线性关系比MTT法明显。而且，MTT法产生不溶于水的蓝紫色结晶，需要有机溶剂 DMSO溶解，操作过程中常会出现溶解不完全或细胞丢失的现象，影响结果的准确性。cck-8法只是加染料的一步操作，操作简单，检测可实时，免去了去除培养基的操作。对环境保护更为有利，不使用有机溶剂DMSO，所需的耗材也少。 克隆形成率法是准确测定药物影响细胞增殖的国内外通用方法，但统计克隆数的工作量大，容易产生人为的误差，不能实现自动化检测。我们使用1000个／孔的低密度接种，延长药物处理时间，使对照组的细胞数与药物处理组的细胞数差异明显，从而保证了cck-8法检测的灵敏度，且可以使检测使用机器进行，不仅减少了人为的误差，也加快实验的进度。 对于悬浮细胞而言，要进行克隆形成率评价药物的作用，必须把细胞用软琼脂进行固定。加入细胞时，未凝固、具有一定热度的琼脂对细胞有一定损伤；整个操作过程也比较麻烦需要加热装置溶解琼脂等。我们首先通过 dox作用贴壁的 A549细胞比较，确定cck-8法的检测灵敏度与克隆形成率法相当，然后把cck-8法应用于检测悬浮细胞，避免了使用克隆形成率法的麻烦。 Coulter细胞计数法能准确统计细胞数，但该仪器较为昂贵，难以在一般的实验室推广使用。我们把cck-8法与Coulter细胞计数法相比较，发现在合适的细胞数情况下，检测的灵敏度没有差别。说明cck-8法用于评价悬浮细胞的增殖也是十分可靠的方法。 综上所述，确定合适的实验条件后，cck-8法可以明显地降低如衰老细胞的干扰，不失为是一种操作简单、重复性好、灵敏度高的检测方法，值得进一步的推广。 absin的cck-8试剂盒和MTT试剂盒产品推荐： |
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