供货周期: | 一周 |
品牌: | 爱必信 |
规格: | 100ml |
货号: | abs9116 |
CAS号: |
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产品描述: 产品名称:Lysis Buffer for WB/IP Assays 描述: 本免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液(Lysis Buffer for WB/IP Assays)是在非变性环境内裂解细胞的一款裂解液,主要成分为 20mM Tris-HCl(pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,以及焦磷酸钠,β-甘油磷酸,正钒酸钠,EDTA 和抑肽酶等多种抑制剂,可广谱且有效抑制蛋白降解,并且维持原先蛋白间相互作用。经本品裂解所得的蛋白样品,适用于 PAGE,蛋白免疫印迹(Western Blot),免疫沉淀(IP),免疫共沉淀,ELISA 等实验。经本品裂解收集的蛋白样品,可使用增强型 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定总蛋白浓度。由于本品含有较高浓度的 Triton X-100 等干扰物质,不适合用 Bradford法来测定总蛋白浓度。 产品组分
别名: 免疫印迹及免疫沉淀用(WB/IP)裂解液;Western及IP细胞裂解液 储存/保存方法: 细胞裂解液A保存于2~8℃,B、C保存于-20℃。 外观: 溶液 使用方法: 试剂准备: 裂解液制备:临用前,取适量的 Western 及 IP 细胞裂解液,在其中分别加入 1%裂解液 B、C, 混匀后使用。 使用说明: 一、对于培养细胞样品: 1、对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没 有干扰,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 100~200μL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下, 使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1~2sec 后,细胞就会被裂解。 2、对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 100~200μL 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。 如果细胞量较多,必需分装成 5~10×105 细胞/管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少 量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。 3、充分裂解后,10000~14000g 离心 3~5min,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western、免疫 沉淀和免疫共沉淀等操作。 注:裂解液用量说明:通常 6 孔板每孔细胞加入 100μL 裂解液已足够,但如果细胞密度非常高 可以适当加大裂解液的用量至 150μL 或 200μL。 二、对于组织样品: 1、把组织剪切成细小的碎片。 2、按照每 20mg 组织加入 100~200μL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加 更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。) 3、用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。 4、充分裂解后,10000~14000g 离心 3~5min,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western、免疫 沉淀和免疫共沉淀等操作。 5、如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈 vortex 使样品 裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆 器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。 注意事项: 1、裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。 2、为了您的自身安全,使用试剂前,请做好防护,如穿实验服,带手套等。
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