供货周期: | 一周 |
品牌: | 爱必信 |
规格: | 100ml |
货号: | abs9332 |
CAS号: |
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产品描述: 产品名称:BCIP/NBT碱性磷酸酶显色试剂盒 描述: BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色试剂盒(BCIP/NBT?Alkaline?Phosphatase?Color?Development?Kit)是一种用于免疫组化显色、Western等膜显色和诱导多功能干细胞iPS鉴定等的试剂盒。BCIP/NBT是碱性磷酸酯酶的常用底物,在碱性磷酸酯酶的催化下,BCIP会被水解产生强反应性的产物,该产物会和NBT发生反应,形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。 组分
别名: BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit 应用: 用于免疫组化显色、Western等膜显色和诱导多功能干细胞iPS的鉴定等。 使用方法: BCIP溶液(100×):置于室温下平衡5分钟,摇匀混合,若出现浑浊或析出,属于正常现象,因其中BCIP溶液的浓度过高所致。吹打混匀后,取出相应的量进行实验即可。 NBT溶液(150×):置于室温下平衡5分钟,摇匀混合,若出现浑浊或析出,属于正常现象,因其中BCIP溶液的浓度过高所致。吹打混匀后,取出相应的量进行实验即可。 1、将凝胶转染至膜上后,用表1所列的洗液洗膜5min 表1 通用的洗液及封闭液 洗液 封闭液 1 1×TBS (20 mM Tris-HCl, pH 7.5,0.9% 氯化钠) 洗液+ 0.5% TWEEN 20 2 1×TBS + 0.05% TWEEN 20 洗液+1~5% BSA 3 1×TBS + 0.05% TWEEN 20 洗液+2~4% 脱脂奶粉 注:1为宽松的条件;3为最严格的条件。推荐使用洗液3和封闭液3(洗液+2% 脱脂奶粉)。 2、在室温下,用封闭液稀释一抗后,与膜孵育2h,期间轻轻摇晃。按照一抗的使用说明书对一抗进行稀释。 3、用洗液洗膜5min。 4、在室温下,用封闭液稀释的二抗(与碱性磷酸酶偶联的二抗)与膜孵育2h,轻轻摇晃。按照二抗使用说明书进行稀释,或用封闭液将二抗稀释1000倍后使用。 5、用洗液洗膜3次,每次5min。 6、在洗膜期间,按照如下比例依次加入各溶液,混匀后即配制成BCIP/NBT染色工作液: 碱性磷酸酯酶显色缓冲液 2.95mL 9.833mL BCIP溶液(100×) 30μL 100μL NBT溶液(150×) 20μL 67μL BCIP/NBT染色工作液 3mL 10mL 7、最后一次洗涤完毕后,去除洗液,加入适量BCIP/NBT染色工作液,确保能充分覆盖样品。 8、室温避光孵育1~5min,直至显色至预期深浅。 9、去除BCIP/NBT染色工作液,用蒸馏水洗涤1-2次即可终止显色反应,或用1%冰乙酸漂洗终止反应。 分析及解决 1、背景颜色过深 加入一抗之前,进行封闭。与样本相同来源的正常血清(10%),作为二抗,会得到最佳的效果; 在免疫印迹中加入的封闭剂,例如10% BSA, 0.05% TWEEN 20,3%脱脂奶粉。当使用avidin-biotin系统时,不要使用脱脂奶粉封闭; 减少染色时间; 用滴定法,确定最佳的工作液的稀释倍数。 2、未显色或显色模糊 调整一抗浓度; 调整二抗浓度; 确定酶的偶联是否有活性; 考虑使用放大系统,例如avidin-biotin; 增加染色时间; 调整样本转染至膜上的时间; 增加样本使用量。 储存/保存方法: 2~8℃避光保存,有效期1年 注意事项: 1、为了您的自身安全,使用试剂前,请做好防护,如穿实验服,带手套等。 2、BCIP对人体有刺激性,NBT对人体有害,请注意适当防护。 3、使用BCIP及NBT之前请离心,避免因液体挂壁而造成的损失。
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