公告提醒:爱必信所有产品和服务仅用于科学研究,不用于临床应用及其他用途提供产品和服务(也不为任何个人提供产品和服务)! 产品描述: 产品名称:XL Site-directed Mutagenesis Kit 描述: 本试剂盒采用反向PCR(Inverse PCR)技术,对含有目标基因的双链环状质粒进行扩增,直接导入突变序列,从而实现单个或多个邻近碱基的突变(mutation)、缺失(deletion)、或插入(insertion)。该技术的原理如图所示。首先以甲基化的质粒DNA为模板,使用人工合成含有目的突变碱基的引物进行扩增反应,然后用DpnI限制性内切酶消化不含突变的质粒模板,再进行转化和筛选。 本试剂盒采用保真性能和扩增效率俱佳的 XL Enzyme,能快速扩增15 kb以下的质粒DNA(15-30 s/kb),最大限度地保持扩增质粒的保真性,大大缩短反应时间,是Site-directed Mutagenesis Kit(abs60097)的升级产品。该方法操作简单快捷,突变阳性率高,严格按说明书操作,6个以下连续碱基的突变率可达90%以上,最多可实现21个连续碱基的插入或删除。 对于非甲基化的质粒(例如从大肠杆菌JM110或SCS110菌株中提取的质粒),可通过转化dam+ 的大肠杆菌菌株(如DH5α、TOP10、JM109、XL1-Blue等),再抽提获得甲基化的质粒作为PCR反应模板。 本试剂盒提供一个4.5 kb、含有突变的lacZ基因的对照质粒(Control Plasmid)。质粒转化大肠杆菌后在含Amp、IPTG和X-gal的琼脂平板上呈白色菌落;采用试剂盒提供的Control Primers成功进行突变反应后,菌落呈现蓝色,可据此检测突变效率。 产品特点: 1、高效快速:采用极高保真性能和极高扩增效率的DNA聚合酶,10 kb质粒突变反应最多只需2.5小时。2、操作简单:采用一步PCR法,不需要磷酸化引物,不需要连接反应,不需要特殊菌株。 3、阳性率高:6个以下连续碱基的突变率可达90%以上。 4、质控对照:提供Control Plasmid和Control Primers,通过X-gal琼脂平板呈色变化监控反应各组分的性能。 5、提供针对高GC模板的High-GC Additive 产品信息:
组分 |
规格 |
XL Enzyme |
16ul |
5x XL Reaction Buffer |
100ul |
2x XL High-GC Reaction Buffer |
250ul |
dNTPs |
25ul |
Dpn I (10 U/ul) |
12ul |
Control Plasmid (5 ng/ul) |
10ul |
Control Primers (10 uM of each) |
10ul |
ddH2O |
1ml |
注意:除ddH2O和Buffer外,各组分使用前请先短暂离心;Buffer使用前请完全解冻并充分混匀。储存/保存方法: -20℃恒温保存,保质期12个月。 产品用途: 15 kb以下质粒的单个或多个邻近碱基的置换(substitution)、缺失(deletion)、或插入(insertion) 产品信息订购:
产品货号 |
产品名称 |
规格 |
价格 |
大包装及货期 |
abs60099 |
XL Site-directed Mutagenesis Kit |
10T |
1382.00 |
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