方案摘要
方案下载| 应用领域 | 制药 |
| 检测样本 | 治疗类生物药品 |
| 检测项目 | 理化性质 |
| 参考标准 | 单克隆抗体；结构稳定性；胶体稳定性；分子间弱相互作用 |
本研究以曲妥珠、利妥昔、贝伐珠为例，从不同角度表征了这３种单抗的稳定性特点，展示了单抗分子稳定性评价的多种维度和思路。
目的 单克隆抗体（单抗）的稳定性是抗体成药性研究中的重要内容，本研究拟探讨从单抗分子的结构稳定性、胶体稳定性、分子间弱相互作用等方面进行稳定性评价的意义。
方法 本研究以曲妥珠、利妥昔、贝伐珠为例，从不同角度表征了这3种单抗的稳定性特点，展示了单抗分子稳定性评价的多种维度和思路。首先，通过检测蛋白内源性荧光（intrinsic fluorescence, IF）技术测得熔解温度（melting temperature, Tm），对抗体分子的结构稳定性进行评估。其次，采用静态光散射技术（static light scattering technique, SLS）预测抗体的胶体稳定性。随后，采用等温稳定性试验（60℃, 48h）对样品的稳定性表现进行实时监测。最后，采用动态光散射技术（dynamic lights scattering technique, DLS）从蛋白溶解状态下其自身分子间弱相互作用角度预测蛋白聚集倾向。结果 IF技术检测发现３种抗体分子第１个熔解温度Tm1均在65℃以上，说明其结构均较稳定。SLS检测显示曲妥珠胶体稳定性最好，升温至95℃未检测到明显的聚集信号，而利妥昔和贝伐珠则在70℃左右出现明显聚集。等温稳定性试验也显示了类似的结果。DLS技术检测显示，曲妥珠的第二维里系数（B22）和扩散相互作用系数（KD）均为正值（3.19*10-3和65.46），预示长期胶体稳定性较好，利妥昔次之，而贝伐珠的B22和KD均为负值（-1.44*10-4和-6.46），提示蛋白分子间容易自缔合。
结论 本研究通过多种技术、从多种角度探讨了单抗药物稳定性评价的内容、层次和深度，为抗体分子筛选、制剂配方优化、抗体分子与制剂配方间的不同组合、稳定性监测等提供了借鉴和参考。
关键词：单克隆抗体；结构稳定性；胶体稳定性；分子间弱相互作用
文献贡献者
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