ISO 由位于新罕布什尔州汉诺威达特茅斯学院的麦克莱伦实验室开发(该实验室现已搬迁至德克萨斯州奥斯汀的德克萨斯大学)。
关于迭代筛选优化
迭代筛选优化(ISO)是一个高度自动化的优化过程,可以帮助研究人员从从最初看起来不太乐观的条件中获得蛋白质晶体。
使用由16种独特成分构建的预制筛网,进行初步筛选实验条件。在此实验中收集图像后,用户通过将每个图像评分为透明、结晶、轻沉淀或重沉淀来打分/分类。基于这些分数,ISO 过程创建了一个新实验,其中每个条件下的沉淀剂浓度都会发生变化-增加或减少。例如,如果初始实验得出明确的分数,则下一个ISO实验 将根据溶解度曲线增加沉淀剂浓度。
然后在新创建的实验(第2轮)上执行此ISO, 并且此类迭代将在一系列中多进行几次。在第一次迭代后,后续每一轮ISO都会考虑最后两 次实验的分数来计算下一次实验中的沉淀物浓度。ROCK MAKER®结晶软件可以为每个 ISO步骤自动生成实验,根据用户的评分调整每个条件的沉淀浓度。
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图 2. 使用ISO策略在每次迭代中增加蛋白质晶体命中(红色)的示例。来自McLellan实验室(UT Austin)的数据
使用ROCK MAKER®和FORMULATOR®轻松实现ISO
使用ROCK MAKER结晶软件和FORMULATOR® Screen Builder筛选,可以快速轻松地将ISO实施到结晶研究中。ISO需使用多种成分,FORMULATOR是唯一能够分配具有多达34种不同成分的复杂ISO筛网的蛋白质结晶液体处理器。
简单的ISO工作流程:
1. 设置新的结晶实验
2. 孵化并根据目测评分
3. ROCK MAKER根据分数自动调整每个条件的沉淀浓度
4. 使用FORMULATOR Screen Builder分配优化结晶筛选条件
5. 每次迭代重复步骤2-4
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