梯度起点调整功能助力仪器间方法迁移的平稳实施

华谱科仪（北京）科技有限公司

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在液相色谱分析中，不同型号仪器间色谱行为存在差异是普遍存在的现象。而造成同样色谱条件在不同型号色谱仪器上存在色谱行为差异的诸多原因中，色谱系统延迟体积差异无疑是造成结果差异的主要原因之一。

液相色谱仪的系统延迟体积不同则主要由仪器整体设计及采用的技术方案不同造成。以梯度模式为例，下图给出了不同梯度模式下其系统延迟体积的情况：

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可以看到，由于四元低压梯度模式其梯度混合点在比例阀并早于泵头，因此整个泵头的体积都将造成梯度延迟。而二元高压混合由于混合点在泵后的混合器部分，因此泵头体积将不会影响梯度延迟。

这就是我们通常认为二元高压的系统体积小，在极端梯度条件下性能更好更稳定这一“色谱常识”的底层技术原因。

那么系统（梯度延迟）体积的不同，会如何影响色谱行为呢？在色谱图上的直观变化是什么呢？

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上图是相同的咖啡因标准样品在不同色谱仪上的色谱图，可以看到同样色谱方法下，咖啡因出峰时间相差0.8min左右。经过简单计算可以判断，保留时间的差别主要是由两个系统间系统延迟体积相差约750ul带来的。

保留时间如此明显的变化为不同仪器间的方法迁移带来了挑战。通常情况下，为了在不同系统间转移方法时获取可比较的色谱图，我们需要对梯度方法进行调整以确保保留时间的一致、可比。而方法的变化一般会带来方法重新验证等一系列的后续工作，使得色谱方法迁移过程变成一个“昂贵的问题”。

为了更方便高效地解决类似问题，华谱科仪开发了梯度起点调整功能。从此客户只需粗略了解色谱仪器的系统体积差，通过计算换算成梯度起点调整的秒数，即可方便的将方法迁移后的色谱行为（保留时间）调整到迁移前的类似水平。

以下是一个实际案例：

实验目的：将在Alliance仪器上开发的色谱方法迁移到华谱科仪S6000 HPLC上

样品：红参中皂苷

色谱柱：Alphasil ES-C18, 4.6×150 mm, 3.5 μm

柱温：30 ℃

流速：1.0 mL/min

进样量：10 μL

检测波长：203 nm

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从色谱图可以看出，通过对梯度起点进行调整，可以确保相同仪器方法在不同色谱仪器上的保留行为（保留时间）基本一致，使得方法迁移被大大简化。而激活这一功能不涉及方法梯度表的修改，无需重做方法验证，在降低成本的同时，提升了工作效率。

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