冰冻切片活性氧(ROS)检测试剂盒

产品概述

组织切片活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针DHE进行活性氧检测的试剂盒。 DHE是一种细胞膜通透性的荧光探针，被活性氧特异性氧化生成红色荧光物质，红色荧光强度与活性氧水平成正比，检测红色荧光强度就可以知道组织切片内活性氧的水平。 在激发波长535 nm，发射波长610 nm附近，使用荧光显微镜/激光共聚焦检测红色荧光强度，从而测定样本内活性氧水平。利用本试剂盒可以快速定性检测样本内活性氧水平变化差异。 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢（H2O2，Hydrogen peroxide）、羟基自由基（•OH，Hydroxyl radical）、单线态氧（1O2，Singlet oxygen）、一氧化氮（NO，Nitric oxide）、超氧阴离子(•O2-，Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ，Peroxyl radical)、过氧羟自由基（HOO• ，hydroperoxyl）及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子（ONOO-，Peroxynitrite anion）、ClO-和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果，在呼吸链中，在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应，在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧：“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2•-)(图1A)。超氧阴离子遇水生成H2O2(图1B)，同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成(图1C)，生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-(图1D)，在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•(图1E)，超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-(图1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。 切片样本的活性氧检测一般最好使用振动切片或者新鲜的冰冻切片样本。石蜡切片样本的ROS在切片的的制作过程中会损失掉，有条件的话就使用振动切片或者冰冻切片样本，一般不建议使用石蜡切片样本。已经制备好的石蜡切片样本中残余的ROS也可以用本试剂盒检测。 有条件的话也可以采用直接用组织样本检测，不需要制备成切片的ROS检测试剂盒。 除了红色荧光的ROS检测试剂盒，也可以提供绿色、蓝色、深红色等其它颜色的检测试剂盒。 可以为您提供各种细胞样本、切片样本、组织样本的活性氧、活性氮检测试剂盒产品。 可以为您提供总活性氧、总活性氮和各种亚型的活性氧/活性氮的检测试剂盒产品。

保存温度

-20℃ 避光

注意事项

1.避免反复冻融。

2.可以根据需要分装后冻存。

3.探针为DMSO溶液，在2-8℃时是固体状态，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

有效期

6个月

检测方法

激光共聚焦显微镜/荧光显微镜

适用样本

1.新鲜冰冻切片 2.振动切片

3.石蜡切片

产品特点

1.使用方便：可用荧光显微镜直接拍照分析；

2.背景低，灵敏度高；

3.线性范围宽，使用方便。

仪器准备

1.激光共聚焦显微镜或荧光显微镜，

2.离心机

3.移液器

4.冰箱

5.冰盒

试剂准备

PBS缓冲液或者HBSS

耗材准备

1.离心管

2.吸头

3.玻片

4.一次性手套

使用注意事项

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。

3.对于某些样本，如果荧光太强，可以按照1:200-1:2000稀释探针。探针标记的时间也可以根据情况在20-60分钟内适当进行调整。

4.冰冻切片制作不需要经过固定脱水包埋等步骤，直接冷冻后切片贴片。

5.有条件也可以采用振动切片的方法。有些方便处理的样品类型也可以采用徒手切片。

6.以下操作步骤仅供参考，请根据实际样本情况调整。

使用方法

一、 试剂配制

1. 根据样本数，用纯水将DHE活性氧荧光探针200-2000倍稀释，配成染色探针工作液。

2. 用纯水将10X清洗液10倍稀释，配成1X清洗液工作液。

二、 探针标记

1. 准备待测的厚为10-20 μm的未经固定处理的冰冻切片。

2. 室温下，小心加上200 μl清洗液工作液，铺满整个切片表面，静置3-5分钟。

3. 小心吸除清洗液。

4. 滴加100-200 μl染色探针工作液，在37℃培养箱避光孵育20-60分钟。

5. 移除染色液。

6. 用PBS洗涤切片2-3次。

7. 加盖玻片或甘油封片。

8. 激光共聚焦/荧光显微镜检测。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！