供货周期: | 7天 |
品牌: | 博尔森 |
型号: | 100T/48S |
货号: | BES-2356BTK |
维生素 E 含量检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂一:自备无水乙醇,常温保存。
2、 试剂二:自备正庚烷,常温保存。
3、 试剂五贮备液的制备:将试剂五的粉剂溶于 2 mL 无水乙醇配制成贮备液,4℃避光保存待用。
4、 试剂五应用液的制备:取试剂五贮备液用无水乙醇 20 倍稀释后使用,建议当天配制当天使用。
5、 标准品:临用前加入 1 mL 试剂三,配成 20 mg/mL 的标准品溶液。
产品说明:
维生素E(Vitamin E)是一种天然脂溶性抗氧化剂,能阻断机体不饱和脂肪酸的过氧化,维持不饱和脂肪酸细胞膜的完整性和正常功能,并可清除超氧阴离子自由基,具有延缓衰老、预防溶血性贫血等作用,在医药、化妆品、保健品、食品行业具有较高的应用价值。
技术指标:
最 低检出限:2.9178 μg/mL
线性范围:3.125-100 μg/mL
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、漩涡震荡仪、无水乙醇、正庚烷、蒸馏水和EP管。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
二、测定步骤
1.分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至510nm,无水乙醇调零。
2.标准溶液的制备:将20mg/mL标准液用试剂三稀释为50、25、12.5、6.25、3.125 μg/mL的标准溶液备用。
3.操作表:依次加入下列试剂
三、维生素 E 含量计算
1. 标准曲线的绘制:
以各个标准溶液的浓度为x轴,其对应的ΔA标准为y轴,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将ΔA带入方程得到x(μg/mL)。
2. 维生素E含量的计算:
(1)按样本质量计算
VE含量(μg/g 质量)=x×4×V样总÷W=2x÷W
(2)按血清(血浆)体积计算
VE含量(μg/mL)=x×4×V样总÷V血清(浆)=10x
4:待测样本为300μL的正庚烷抽提液加900μL的无水乙醇,相当于将抽提样本稀释4倍后检测;V样总:提取过程加入正庚烷的体积,0.5mL;W:样本质量,g;V血清(浆):提取过程中加入血清(浆)体积,0.2mL。
注意事项:
1、 离心后,在吸取上层正庚烷抽提液时,切勿将中间无水乙醇与水的液相层吸入,以免影响试验结果。
2、 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
3、 若反应体系产生沉淀,建议将待测样本用试剂三进行适当的稀释,并在计算公式中乘以稀释倍数。
4、 比色皿需用无水乙醇冲洗,勿用蒸馏水以防出现分层影响试验数据。
5、 显色结束后尽快完成测定。
实验实例:
1、 取 0.1g 核桃依次加入 200μL 蒸馏水,300μL 的试剂一,500μL 试剂二进行匀浆研磨,匀浆后在漩涡混匀仪上震荡 5min(充分抽提),于 25℃,5000g 离心 5min,取上层正庚烷抽提液 300μL 加入到 900μL 无水乙醇中(上层抽提液:无水乙醇=1:3),之后按照测定步骤操作,用 96 孔板测得计算 ΔA 测定管=A 测定管-A 对照管=0.336-0.046=0.29,根据标准曲线 y=0.0042x+0.1849,计算 x=25.02,按样本质量计算维生素 E 含量得:
VE 含量(μg/g 质量)=2×x÷W=2×25.02÷0.1=500.4 μg/g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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