供货周期: | 7天 |
品牌: | 博尔森 |
型号: | 500U |
货号: | BES26011MDE |
Taq DNA聚合酶,5U/uL
产品及特点 本产品是 Thermus aquaticus(水生栖热菌)的 DNA 聚合酶基因在 E. coli 中表达而得,具有以双链 DNA 为模板的 5'→3'聚合酶活性和 5'→3'外切酶 活性。Taq DNA 聚合酶长为 832 个氨基酸,分子量为 94 Kd。该酶可以广泛 用于 PCR,RT-PCR,加尾反应等。
1. 耐热 DNA 聚合活性,该酶在 90℃以上几乎无 DNA 合成,在 75~80℃时 延伸率约 150 个核苷酸,70℃时为 60 个核苷酸/秒,55℃时为 24 个核 苷酸/秒。在 65~68℃并有 Mn2+存在时还具有逆转录活性。
2. 热稳定,在 PCR 混合物中 95℃保温 40 分钟仍可保持 50%的活性。
3. Mn2+离子依赖性,MgCl2浓度在 2.0 mM 时该酶催化活性最高。
4. 本酶无 3'→5'外切活性,不具 3'→5'校对功能,碱基错配机率为 2.1×10-4。
规格及成分
运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法 以λ DNA 为模板进行 PCR 扩增反应为例
1.按下列组份配制 PCR 反应液。
Taq DNA 聚合酶(5U/ uL) 0.25 uL
10×PCR Buffer(含 Mg2+) 5 uL
MgCl2
(25 mM) 根据需要补加
自备 dNTP(各 2.5 mM) 4 uL
模板 DNA 见下
引物 1(20 uM) 1 uL
引物 2(20 uM) 1 uL
灭菌蒸馏水 Up to 50 uL
注:10×PCR Buffer 含 15 mM MgCl2
(在 PCR 体系中的终浓度为
1.5 mM),是否需要补加 MgCl2 根据实验决定。但一般不需要补加。
推荐 50 uL PCR 反应体系中模板 DNA 推荐使用量
哺乳动物基因组 DNA 0.5-1 ug
酵母基因组 DNA 5-500 ng
细菌基因组 DNA 0.5-50 ng
质粒 DNA 5-500 pg
PCR 回收片段 1-100 pg
2.PCR 反应条件
以λDNA 为模板,扩增 1 kbp 的 DNA 片段的 PCR 反应条件如下:
94℃ 30 sec.
55℃ 30 sec. 30-35cycles
72℃ 1 min.
注:PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况,设定最佳的反应条件(温度、时间等)。
注意事项
PCR 的反应液请在冰中配制,然后置于 PCR 反应仪上进行 PCR 反应。这种冷启动法(Cool Start Method)可增强 PCR 扩增的特异性,减少 PCR 过程中的非特异性反应,能得到良好的 PCR 结果。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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