小麦内标准GAG56D基因探针法荧光定量PCR试剂盒

报价:¥3990
供货周期: 7天
品牌: 博尔森
型号: 50次
货号: BES201580P
上海博尔森生物科技有限公司
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产品详情

小麦内标准GAG56D基因探针法荧光定量PCR试剂盒

【产品名称】

英文名称:Standard GAG56D gene in wheat PCR Kit

中文名称:小麦内标准GAG56D基因探针法荧光定量PCR试剂盒

【包装规格】

50T/

11.jpg

【预期用途】

本产品是以探针法荧光定量 PCR 技术为基础开发的专门检测小麦内标准GAG56D 基因试剂盒,它具有下列特点:

1. 即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板。

2. 引物和探针经过优化,灵敏性高。

3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4. 特异性高,引物是根据小麦内标准 GAG56D 基因高度保守区设计。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 PCR 反应。

6. 本产品只能用于科研。

【检验原理】

本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 PCR 技术,针对小麦内标准GAG56D基因的基因高度保守区域设计特异性引物,用荧光 PCR 技术对小麦内标准GAG56D基因的核酸进行体外扩增检测,在反应体系中含小麦内标准GAG56D基因核酸模板的情况下,PCR 反应得以进行并释放荧光信号,利用仪器对 PCR 过程中相应通道的信号强度进行实时监测和输出,实现检测结果的定性、定量分析。

【试剂组成】

名称

规格

小麦内标准GAG56D基因扩增液

25μL×1管

小麦内标准GAG56D基因反应液

975μL×1管

小麦内标准GAG56D基因阳性质控品

50μL×1管

小麦内标准GAG56D基因阴性质控品

50μL×1管

说明书

1份

备注:1)不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

2)试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融少于 7 次,有效期 12 个月。

【适用仪器】

ABI MX3000P/3005PLightCyclerBio-Radeppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。

自备:无 DNA/RNA酶的 1.5mL 离心管,0.2mLPCR反应管,滤芯吸头(规格:10μL200μL1000μL),离心机,振荡混合器,各种规格的移液器。

【样品要求】

1. 根据实际情况,病死或扑杀的牛,无菌剪取肠道等样品,活畜取全血、血清血浆、粪便、呕吐物、口腔鼻咽呼吸道分泌物、咽喉部鼻孔眼部和肛门拭子和病毒培养物作为检测样本。

2. 应避免样本间交叉污染,样本采集后应及时检测,也可保存于-20±5℃待检,长期保存应置于-70℃以下。

【样品保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20,长期保存可置-70,但不能超过 6 个月,标本运送应采用 2~8冰袋运输,严禁反复冻融。

【使用方法】

1. 样品处理(样本处理区)

1.1 样本前处理

按照试剂盒操作说明或者微生物样品处理方法做好样品前处理。

1.2 DNA 提取

根据您实验室的具体情况和样品类型,选择适当的提取策略方法。为了使实验结果稳定、有效、可靠,我们建议使用商品化的试剂盒进行提取,严格按照对应试剂盒说明书进行操作,样本核酸提取过程中应避免污染,提取好的模板样品如不能立即检测,建议-15℃以下保存。

推荐采用我们公司研发生产的试剂盒:Hypure 病毒基因组 DNA 提取试剂盒

2. 试剂配制(试剂准备区)

2.1 -15℃以下冰箱中取出试剂盒平衡到室温(2025℃),注意避免强光照射,待完全溶解后振荡混匀并低速离心 10 s,使用低吸附吸头分液取样,避免试剂损失和浪费。

2.2 根据待检测样本总数,设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照;样品每满 7 份,多配制 1 ),每测试反应体系配制如下表:

试剂

小麦内标准GAG56D基因反应液

小麦内标准GAG56D基因扩增液

用量(样本数为N)

19.5μL

0.5μL

2.3 在适当容积的无菌离心管中加入上述试剂,充分振荡混匀后 2000 rpm 离心 10 s,按照 20 μL/管分装量将试剂分装至八联 PCR 反应管中。

2.4 盖紧八联 PCR 反应管盖, 并注意做好相应标识(请标记在八联 PCR 反应管盖两端突出部位,切勿标记在八联 PCR 反应管盖中间,以免影响信号采集)。将 PCR 应管转移至样本准备区,剩余试剂放回-15℃以下冰箱冷冻保存。

3. 加样(样本处理区)

将步骤 1.2 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心,核酸加样过程中应避免污染。

4. PCR 扩增(核酸扩增区)

4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内, 并记录放置顺序。

4.2 设置好通道、样品信息,反应体系设置为 25 μL

荧光通道选择:检测通道选择 FAM, 淬灭通道选择 NONE,参比荧光选 NONE

4.4 推荐循环参数设置:

步骤

循环数

温度

时间

收集荧光信号

1

1 cycle

95℃

3min

2

40 cycle

95℃

15sec

55℃

30sec

5. 结果分析判定

5.1 结果分析条件设定

设置 Baseline Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节 Baseline start (一般可在 3~15 范围内调节)stop 值(一般可在 5~20 范围内调节),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。

5.2 结果判断

阳性:检测通道 Ct 值35.0,且曲线有明显的指数增长曲线。

可疑:检测通道 Ct 值>35.0,且出现典型扩增曲线的样本建议重复试验,重复试验结果出现 Ct 值38.0 和典型扩增曲线者为阳性,否则为阴性。

阴性:检测结果 Ct 值无 Ct 值,无明显的扩增曲线。

6. 质控标准

阴性质控品:无明显扩增曲线或无 Ct 值显示;

阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且 Ct 值30

以上条件应同时满足,否则实验视为无效。

7. 产品性能指标

阴阳性参考品符合率:5 份阳性参考品符合率为 100;10 份阴性参考品符合率为 100

最低检测限:1.0×103copies/mL

精密度:批内、批间精密度检测 Ct 值的变异系数(CV)均小于等于 3%。

8. 检测方法的局限性

样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;

样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;

阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;

病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;

不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;

试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;

本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。

9. 注意事项

所有操作严格按照说明书进行;

试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;

反应液应避光保存;

反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;

使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;

样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;

实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;

试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!

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