供货周期: | 现货 |
品牌: | 博尔森 |
型号: | 100ml |
货号: | BES25025C |
细胞裂解液(Tris-HCl)
Cell Lysis buffer(Tris-HCl)
规格:
100ml,500ml储存条件:-20ºC 保存,一年有效。
产品描述:
Tris-HCl 细胞裂解液是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液,是一种相对温和的细胞裂解液,适用于提取细胞可溶性蛋白。本产品裂解细胞获得的裂解产物,可用于 PAGE,蛋白印迹(Western Blot),免疫沉淀(immnolprecipitation,IP),免疫共沉淀(co-IP) 和蛋白与多肽的分离纯化。
本产品的主要成分为 Tris、EDTA、蔗糖,如果实验需要,需另行自备 PMSF 等蛋白酶抑制剂。裂解蛋白产物,可以用博奥森生产的 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。
使用说明:
1. 培养细胞
(1)取出细胞裂解液,待融化后,颠倒混匀数次,可适量分装冻存。如果实验需要,按比例加入 PMSF(使其最终浓度为 1mM)或其他蛋白酶抑制剂,混匀,立即使用。
(2)贴壁细胞,去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗 2-3 遍 (如血清中的蛋白没有干扰,也可以不洗)。按 6 孔板每孔加入 100-200 微升的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞数秒后细胞就会被裂解。
(3)悬浮细胞,收集培养细胞,离心去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗 2-3 遍(如血清中的蛋白没有干扰,也可以不洗),用手指把细胞用力弹散,按 6 孔板每孔细胞加入 100-200 微升的比例加入裂解液。如果细胞数量较大,应按 50-100 万细胞/管分装或根据细胞数量按比例增加裂解液。用手指轻弹管底以促进裂解液和细胞充分接触,裂解完全时应无明显的细胞颗粒。
(4)裂解物经 10,000-14,000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(5)裂解液用量说明:通常 6 孔板每孔细胞加入 100 微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 150 微升或 200 微升。
2. 组织样品
取 Ep 管,分别称重标记,把组织剪切成小块装入 Ep 管中,称重。按每 20 毫克组织加 100-200 微升的比例加入裂解液(如裂解不完全,可以适当增加裂解液的用量;如需要的蛋白样品浓度较高,可以适当减少裂解液的用量)。用手握式电动组织细胞匀浆器匀浆约 1 分钟或直至充分裂解。10,000-14,000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
如果组织样品本身非常细小,如淋巴细胞,可直接加入裂解液裂解,通过振荡(Vortex)以使样品裂解完全。
注意事项:
1. 为获得最佳的实验效果,可适当分装使用,以尽量避免反复冻融。
2. PMSF 不稳定,应现用现加。
3. 裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。
4. 部分蛋白酶抑制剂均有较高的毒性,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。一旦直接接触,请立即用流水冲洗,再向医疗保健结构咨询。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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