细胞划痕实验
( Wound-Healing Assay )
细胞划痕实验(又称伤口愈合实验,Wound-Healing Assay)是检测细胞迁移、肿瘤侵袭的常规实验。通常在体外培养的单层贴壁细胞上,人为得在细胞生长的中间区域划线,每隔一定时间进行拍照记录,获得多个时间点的图片序列,通过统计划痕面积或宽度随着时间的变化、以及伤口愈合百分比,来反映细胞的侵袭性。
理想状态下的划痕实验,细胞分布均匀,划痕清晰可辨。然而在现实实验中,我们常常遇到以下的划痕图像和不准确的分析结果:
图1、划痕实验原始图片(左侧)及分析结果(右侧),黄色为识别显示的轮廓
因为,传统的细胞划痕实验分析是通过采集不同时间点的细胞图像,再运用第三方软件来对拍摄的细胞图像进行分析的,整个过程相对繁琐且复杂,结果也可能不够准确。
相对于传统的实验方法,我们的Cellaview赛乐微MN-100能够实时展示细胞划痕愈合情况,无需再将不同时间点的拍摄图像导入ImagePro Plus或ImageJ 等软件进行图片转换、边界识别、面积计算等操作,可以直接将实验结果展示出来,使划痕实验变得轻松简单。
图2、Cellaview细胞智能监控助手
是的,您没看错!细胞划痕实验就能如此简单!接下来,我们手把手教您,如何用Cellaview赛乐微MN-100做细胞划痕实验。
一、细胞划痕实验常用材料
6孔板、marker笔、直尺、胰酶、枪头、PBS、胰酶、基础培养基等。
二、细胞划痕实验步骤
Step 1 板底画线
用marker笔在6孔板背后,用直尺比着均匀画线,每隔0.5cm左右画一条线,横穿过整排孔。每孔可以画3-4条线。
图3、板底画线
Step 2 细胞铺板
在6孔板孔中加入约5×105个细胞(每种细胞有所差异,根据实验前摸索的细胞浓度进行铺板)。
Step 3 划痕
第二天,细胞长满到约90%后,用10uL白枪头垂直背后的横线在孔板中进行划痕。尽量保证划线笔直,每条划痕宽度相近,保证实验数据的可比性。
图4、细胞划痕
Step 4 清洗
用PBS清洗细胞2~3次,洗掉划下的细胞,加入无血清的基础培养基进行培养。
Step 5 拍照
Cellaview赛乐微MN-100表面用75%酒精擦拭后,放入细胞培养箱中,将划痕过的六孔板放在Cellaview赛乐微MN-100平台上。通过数据线将Cellaview赛乐微 MN-100与计算机进行连接,随后在计算机上打开miniEYES软件,根据实验需要设置拍摄参数进行拍摄。拍照时“划痕”的方向最好在软件视野内为水平的或者垂直的。
图5、划痕拍摄
Step6 分析
Cellaview赛乐微MN-100可以边拍摄不同时间点的细胞图像边进行数据分析,实时呈现细胞迁移情况(如图6、7所示)。
图6、不同时间点细胞划痕图像展示
图7、细胞划痕区域面积变化
Cellaview赛乐微MN-100通过实时观察细胞划痕愈合情况,同步分析实验数据,通过细胞汇合度的变化反映细胞迁移情况。因此,划痕实验结果清晰明了,无需再使用其他软件进行分析,整个实验轻松便捷。此外,在整个培养过程中,培养皿一直位于培养箱内,细胞能够一直处于较为稳定的培养环境,不会因频繁拿取切换环境而影响细胞生长,也不会因此导致细胞污染,实验结果更加准确。
看到这里,您是不是已经get到了?只要有Cellaview赛乐微MN-100,根本无需繁琐的数据处理。它可以代劳一切,给出又好又漂亮的结果。从此细胞实验大概可以边做边快乐地飞起来了吧。那么,赶紧把握时机,动动小手参与以下活动,赢取试用机会吧!
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