【问答总结】力显于清华大学活细胞与超高研讨会作STORM报告

8月8日至13日，清华大学蛋白质研究技术中心联合中国细胞生物学学会细胞器生物学分会主办第三届活细胞与超高分辨成像高级研讨会。

8月10日，清华大学欧光朔教授、清华大学吴嘉敏助理教授、清华大学王瑾瑜工程师、INVIEW 宁波力显智能科技有限公司研发总监王莹进行了精彩的讲座和演示。

（1）iSTORM是否可以快速找到目标细胞？

答：可以先用宽场成像，对样品整体进行快速扫描，找到目标细胞后进行超高成像。

（2）iSTORM是怎么实现20nm的分辨率？

答：使用配置中的缓冲液和染料及照明光配合，可以使样品上标记的荧光染料“闪烁”，使得原始图像上可以获得单分子的荧光染料图像，之后通过单分子定位原理，对每个亮点进行位置拟合，并记录在超高成像结果中。单个荧光点的定位精度与拍摄中获得的荧光点光子数目有关系，一般情况下可以将分辨率提升10倍。

（3）使用iSTORM进行拍摄成像所需的时间是多久？

答：根据样品及结构的不同，成像时间也不同。结构比较复杂的固定细胞可能要几分钟到十几分钟，活细胞成像最快可以几秒钟完成。

（4）iSTORM如何保证锁定稳定性？

答：使用物理锁定的方式，实时追踪样品上的一个基准点的位置，并根据此移动样品位置，补偿样品漂移。因为基准点可以在样品制备之前加入，并且在成像过程中亮度保持稳定，所以不会增加样品制备的复杂性，可以在整个成像过程中保持样品位置稳定在1nm左右。

（5）iSTORM如何保证激发照明的均匀性？

答：采用tirf照明，一般情况下高斯光束照明均匀性不会对成像造成影响，在对均匀性要求较高的情况下，可以对光束进行处理整形。

（6）可以实现超高实时成像吗？

答：算法经过优化后，iSTORM超高图像可以实现实时重构，立等可得。

（7）是否在三个维度都能保持样品不漂移？

答：可以的，可以使用商用显微镜的锁焦系统，z方向锁焦精度在20-50nm；使用力显三维锁定系统，z方向锁定精度可以达到5nm。

（8）iSTORM有对固定细胞的核孔复合物成像过吗？标记策略有什么建议？

答：有使用nanobody对核孔复合物成像的经验。标记策略需要根据样品情况具体分析。