应用案例丨产褐藻胶裂解酶菌株筛选与高产酶菌株的ARTP诱变选育

河北农业大学黄惠琴研究员研究团队发表在知名期刊《中国酿造》上的一篇文章:产褐藻胶裂解酶菌株筛选与高产酶菌株的ARTP诱变选育。

文章摘要内容如下:

褐藻胶裂解酶是制备生物活性寡糖的重要工具酶,可通过β-消除反应将褐藻酸钠降解为在非还原端具有双键的不饱和寡糖,在食品、农业、工业等行业具有重要的应用价值。由于现有微生物产酶量少、酶活低,限制了其进一步开发应用,寻找新的高效产酶菌、深入研究酶的产生条件、提高菌株发酵酶活力是迫切需要解决的问题。诱变是提高微生物发酵产酶水平的有效方法之一,已成为微生物诱变育种的重要技术常压室温等离子体(ARTP)诱变是一种基于大气环境温度和射频等离子体的新型微生物诱变育种技术,可在大气压和室温条件下高效诱导脱氧核糖核酸断链,具有条件温和、成本低、效率高的特点,是微生物基因组的高效快速诱变育种技术。

本研究采用平板酶解圈法从南海海域海藻、动物及沉积物样品中筛选产褐藻胶裂解酶细菌,对筛选菌株进行分子生物学鉴定,并利用ARTP诱变技术选育高产褐藻胶裂解酶菌株。结果表明,共分离筛选得到酶活较高的细菌14株,16S rDNA比对分析结果表明,它们隶属于3个门、5个纲、7个目、8个科、9个属,其中有5株菌(占35.7%)可能代表着新的分类单元。以高产褐藻胶裂解酶海藻类芽孢杆菌(Paenibacillus algicola)HB172198T作为原始菌株,利用ARTP诱变技术选育获得2株褐藻胶裂解酶活力明显提高的突变株(编号分别为30-19、80-6),其酶活力分别比原始菌株提高32.6%21.6%,且连续6次传代培养诱变菌株的产酶遗传性状稳定

文章精彩内容如下:

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▲图1丨部分筛选菌株酶解圈直径


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▲图4丨ARTP诱变菌株HB172198^T的致死率曲线


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▲图6丨高产褐藻胶裂解酶突变菌株遗传稳定性实验结果


背景信息


常压室温等离子体诱变育种仪ARTP(Atmospheric Room Temperature Plasma)是一种全新的射频放电技术,该技术使用惰性气体放电,能够在常压室温条件下产生大量高能量的活性粒子;研究表明,活性粒子可以有效的用于细胞的遗传物质并导致DNA结构损伤,进而利用细胞自身高容错率的修复机制,产生大量的突变位点,最终获得大容量的基因突变库。

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▲图丨常压室温等离子体诱变育种仪ARTP(来源:天木生物)


ARTP特点:

  • 非转基因手段,突变性能更强、突变位点更丰富

  • 专有氦气等离子体有变技术,能量高,基因损伤强度大

  • 放电条件温和,活性粒子丰富,使用方便安全

  • 易维护、运行费用低

  • 应用范围广

截止到2022年08月29日,中文文献404篇,英文文献167篇,专利230篇,学位论文165篇,共计966篇

应用领域:

原核生物(如细菌、放线菌等)、真核生物(如霉菌、酵母、藻类、高等真菌等)及植物细胞。


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