iPSC基质胶Matriclone的应用TIPS：驯化

Advanced Instruments

2024/06/17 16:22

前言：

Matriclone 作为一种新型干细胞培养基质胶，因其贴壁效果好，无需预铺板，成像清晰，受到大量用户的好评，纷纷将原有的基质胶切换为 MatriClone，那么，正如任何培养因素的改变，细胞需要适应期一样，从一种基质胶过渡到另一种，需要对细胞进行驯化，帮助细胞渡过适应期。本篇文章着重介绍细胞从 Matrigel 过渡至 MatriClone 的驯化操作流程，以及驯化后传至 10 代干性指标的检测。

方法

选取两株培养在 Matrigel 上的 iPSC 细胞株，命名为细胞株 1 及细胞株 2，均使用 mTeSR™ PLUS media (Stem Cell Technologies) 培养基进行培养。首先我们对细胞进行消化 (TrypLE) ，离心，重悬在加入 matriclone 的培养剂中，铺入 6 孔板。37⁰C，5% CO₂ 培养 3-4 天至汇合度 50%-60%，进行传代，重复以上步骤，直至传至 4 代，完成驯化。

将驯化完成的细胞继续进行传代，传至 10 代后，对细胞进行消化（TrypLE™ Express (Gibco) ），重悬后加入 96 孔板中，培养 1-3 天。之后使用 4% 多聚甲醛进行固定，使用 PBS 缓冲液保存在 2-8℃ 中。对细胞进行免疫组化染色，荧光显微镜下检测干细胞干性标志物 OCT4 以及 NANOG 的表达情况。

图 1. 免疫组化干性标记基因 OCT4 及 NANONG 表达结果。DAPI 作为标记细胞核的对照。β-tublin 染色用于克隆形态的观察。样品取自驯化完全后传代 10 代次的细胞。

结果

如图 1 所示，细胞株 1 及细胞株 2，驯化后传代 10 次，干性指标 OCT4 及 NANOG 表达量高，细胞形态良好。

结论

在细胞培养过程中，切换基质胶时，需要对细胞进行驯化至少 2 代以上。驯化后传至 10 代，细胞干性及形态均保持良好。

长按或扫描上方二维码关注我们

Advanced Instruments成立于1955年，总部位于美国马萨诸塞州诺伍德，60 多年来一直致力于帮助生物制药，临床及食品饮料行业客户提升测试结果的质量，实现可信赖的实验结果，并不断提高企业的生产效率。

安达望（上海）科技有限公司是Advanced Instruments在中国依法成立的全资子公司。

阅读10次

关注

上一篇超微量移液装置精度如何保障？基于双染料光度法的Artel移液装置验证系统重磅上市！

下一篇 ICON 又出新功能 - 糖基化快速检测不是梦