细菌内毒素（脂多糖）的的纯化

科德角国际生物医学科技（北京）有限公司

2022/09/13 10:29

脂多糖（Lipopoly saccharide，LPS）是革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种成分，脂多糖对宿主是有毒性的。脂多糖只有当细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来，所以叫做内毒素。

三氯醋酸法（Trichloroacetic Acid，TCA）、酚水法、苯酚╱氯仿╱石油醚法（PCP）、DMSO法、高压超声处理法所提取的LPS或多或少受到蛋白质、核酸及多糖的污染，故需作一定的纯化。LPS的纯化方法目前最常用的为超速离心（4万转×4小时，共三次），在这一条件下，LPS可沉淀下去，而蛋白质、核酸及多糖则保留在上清液中，去除上清液即可得到较为纯化的LPS。

但是这一方法需时较长，且质量过关的超速离心机目前在国内亦不十分普及，故而难以推广应用。我们在实际工作中体会到，用任何方法提取的LPS，可再以PCP纯化一次（140ml/g LPS），然后只需一次超离，即可取得高度纯化的LPS。

提取的LPS除可被蛋白质、核酸及多糖污染外，还可被一些小分子物质，如多胺、阳离子（Ca++、Mg++、K+等）的污染。通过电透析可将这类小分子物质除去。此时形成的LPS为酸性LPS（由LPS中类脂A上的磷酸基团形成的)。应用碱中和LPS，可变成LPS的盐。如用NaOH中和则可变成LPS钠盐，而应用三乙基乙胺则可变成LPS三乙胺盐、后者极易溶解于水，已广泛地应用于生物学研究。

综上所述，LPS提取方法较多，应当根据菌种和实验条件而选用合适方法。PCP法对R型菌尤显长处，高压超声法虽可用于S或R菌，但方法步骤繁杂；DMSO法与TCA法已很少用到；而酚水法无论产量，纯度及物理性质均较满意的，不失为一个实用的方法。LPS纯化目前一般采用PCP法及一次超速离心，应用该法可使LPS污染物包括蛋白质、核酸及多糖除去，而应用片透析方法，则可除去LPS中的小分子物质如多胺、二价阳离子，从而可得LPS转化成实验需要的盐类。

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